簡介：研究目的本文采用智能材料壓電陶瓷裝置，通過檢測MC3T3E1成骨樣細胞增殖活性、細胞分化特異基因表達探討三維培養(yǎng)條件下細胞對不同力學強度的生物學響應。材料與方法1采用冷凍干燥制備不同質量比殼聚糖羥基磷灰石脫鈣骨基質CHITOSANHYDROXYAPATITEDEMINERALIZEDBONEMATRIX，CSHADBM復合支架材料。掃描電鏡SCANNINGELECTRONMICROSCOPY，SEM觀察其形貌，MICROCT分析支架的微結構，材料試驗機測試不同質量比CSHADBM復合材料的壓縮彈性模量和壓縮強度。采用體外培養(yǎng)細胞的方法，將成骨前體細胞MC3T3E1直接接種到CSHADBM三維支架材料上，共培養(yǎng)1、3、5、7D，采用MTS方法繪制細胞增殖曲線，SEM、組織化學染色觀察細胞形態(tài)。選擇后期實驗用材料及最佳加載時間。2采用有限元FINITEELEMENT，FE分析方法計算三維THREEDIMENSIONAL，3D支架內部單個細胞所受到的作用力大小及相關力學參數，根據此數據來優(yōu)化工程化骨組織體外構建的力學刺激條件，采用智能材料壓電陶瓷對細胞支架材料復合物進行力學加載。3根據CSHADBM復合支架材料生物相容性研究結果和實驗室前期結果，將加載條件設定為每次1H，1次D，連續(xù)6D，頻率為1HZ，工作應變?yōu)?ΜΕ、1200ΜΕ、2800ΜΕ、7000ΜΕ，用MTS檢測細胞增殖情況，采用RTPCR方法測定特異基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BONEMPHOGEICPROTEIN2，BMP2、RUNX2或稱核心結合因子CEBINDINGFACTAL，CBFA1、堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASE，ALP、Ⅰ型膠原COLLAGENTYPEⅠ，COLⅠ及骨鈣素OSTEOCALCIN，OCN的基因表達情況，采用WESTERNBLOT方法測定BMP2、RUNX2的蛋白表達情況。研究結果1通過冷凍干燥法制備出具有良好相互連通孔隙結構100ΜM的3D材料。CSHADBM復合材料具有連通的多孔結構，孔隙率為48％65％，材料的平均壓縮模量和最終壓縮強度分別為36KPA和1124KPA。在DBM一定的情況下，隨著HA量的增加，體積分數VOLUMEFRACTION增加，支架孔壁厚度TRABECULARTHICKNESS，TBTH和支架孔隙間隙TRABECULARSEPARATION增加，但支架表面積體積比BONESURFACEVOLUMERATIO，BSBV減少，總的孔隙率TOTALPOSITY降低。2參照生理載荷范圍，根據有限元計算的支架材料內部應變分布，確定實驗表觀加載應變?yōu)?ΜΕ、1200ΜΕ、2800ΜΕ、7000ΜΕ。施加1200ΜΕ表觀加載應變時，內部應變60％在1000ΜΕ2000ΜΕ之間，但主要集中在1000ΜΕ；施加2800ΜΕ表觀加載應變時，內部應變60％在1000ΜΕ2000ΜΕ之間，但主要集中在2000ΜΕ；施加7000ΜΕ表觀加載應變時，內部應變60％大于5000ΜΕ。四組樣品在支架孔壁處存在應力集中現象。3細胞增殖曲線說明7000ΜΕ的壓縮應變抑制細胞增殖。與靜態(tài)培養(yǎng)相比，在1200ΜΕ、2800ΜΕ的壓縮應變作用下，細胞增殖速度快，數量增多。4RTPCR以及WESTERNBLOT結果顯示，與靜態(tài)培養(yǎng)組相比，1200ΜΕ、2800ΜΕ壓縮應變促進了成骨分化特異基因BMP2、RUNX2、ALP、COLⅠ及OCN的表達，2800ΜΕ壓縮應變條件下表達最強，而7000ΜΕ壓縮應變抑制其表達。研究結論1六種材料中3WT％HA材料組具有理想的孔隙結構100ΜM。MC3T3E1成骨前體細胞易在CSHADBM三維支架材料上黏附、增殖，表明該支架材料具有良好的生物相容性。根據材料結構參數、力學特性及細胞相容性結果確定質量比3315組的支架材料作為后期實驗材料。根據細胞增殖曲線確定壓縮應變時間為6D。2壓縮應變可促進成骨，為研究力學作用增加骨強度提供了一個分子模型。合適的力學刺激作用下細胞的生物學響應表明力學刺激在促進骨折愈合中的重要性。研究結果還表明超生理力學刺激抑制細胞的增殖。3通過有限元分析方法得到了支架材料局部各處的應變分布，計算出細胞在三維培養(yǎng)條件下受到的主要的力學作用，確定表觀加載應變。合適的力學刺激1200ΜΕ、2800ΜΕ作用下促進細胞的增殖分化，而超生理力學刺激7000ΜΕ抑制細胞增殖。由此說明利用有限元分析方法探索骨組織工程中的微觀力學環(huán)境是一種較為有效的途徑。

簡介：點擊查看更多CacyBP-SIP過表達對卵巢子宮內膜異位癥在位內膜間質細胞生物學功能的影響.pdf精彩內容。

簡介：目的1探討SIRNA沉默PCSK6基因對膠原誘導性關節(jié)炎CIA成纖維樣滑膜細胞FLS生物學行為的影響。2探討外源性PCSK6重組蛋白對類風濕關節(jié)炎RA成纖維樣滑膜細胞生物學行為的影響及其分子機制。方法1采用牛Ⅱ型膠原誘導大鼠CIA模型，取膝關節(jié)滑膜組織原代培養(yǎng)FLS；采用人工合成的大鼠PCSK6特異SIRNA特異性抑制PCSK6在CIAFLS中的表達，以NEGATIVESIRNA為陰性對照組，瞬時轉染24H、36H，采用RTQPCR法檢測抑制效率，同時檢測PCSK6基因沉默后各相關基因的表達；采用MTT、TRANSWELL、細胞劃痕、流式細胞術、ELISA等方法檢測干擾PCSK6表達后對大鼠CIAFLS增殖、侵襲、遷移、細胞周期和相關炎性因子分泌的影響。2采用PCSK6重組蛋白誘導RAFLS，采用MTT、TRANSWELL、細胞劃痕、流式細胞術、ELISA等方法檢測PCSK6重組蛋白對RAFLS增殖、侵襲、遷移、細胞周期和凋亡以及相關炎性因子分泌的影響；采用RTQPCR法檢測PCSK6重組蛋白刺激后各相關基因的表達；采用WESTERNBLOT法檢測PCSK6重組蛋白對基質金屬蛋白酶MMP9以及ERK、STAT3、WNT3A、NODAL、MT、NFΚBP65、NFΚBP105P50信號轉導通路的影響。采用通路抑制劑PD98059、STATTIC、PDTC分別抑制ERK、STAT3、NFΚBP65通路，與PCSK6重組蛋白共同作用于RAFLS，利用MTT、TRANSWELL、細胞劃痕、流式細胞術、ELISA等方法檢測ERK、STAT3、NFΚBP65通路抑制劑對PCSK6重組蛋白誘導的RAFLS增殖、侵襲、遷移、細胞周期和凋亡以及相關炎性因子分泌的影響。結果1轉染特異性SIRNAPCSK6后，干擾組與陰性對照組相比，PCSK6MRNA水平明顯被抑制P結論1內源性PCSK6基因沉默對CIAFLS的生物學行為具有一定抑制作用，為進一步研究CIA發(fā)病機制奠定基礎。2外源性PCSK6重組蛋白對RAFLS的增殖、遷移、侵襲和炎癥因子分泌等生物學行為具有一定促進作用；PCSK6通過參與ERK、STAT3、NFΚBP65信號轉導通路來調控RAFLS的生物學行為。PCSK6可以作為研究RA發(fā)病機制、藥物篩選以及免疫治療的新靶點。

簡介：摘要II摘要目的目的1、檢測OLFML2A基因在肝癌細胞株中的表達；2、構建OLFML2A基因的RNAI慢病毒；3、檢測OLFML2ARNAI慢病毒感染肝癌BEL7404細胞后，細胞的增殖、細胞周期及凋亡的變化，初步明確OLFML2A基因對肝癌細胞生物學行為的影響。方法方法1、構建OLFML2A基因RNAI慢病毒；2、采用熒光顯微鏡觀察GFP綠色熒光來確定感染效率，通過RTQPCR及WESTERNBOLT等分析感染慢病毒后OLFML2A基因表達的變化；3、對數生長期的BEL7404細胞株分為兩組慢病毒空載體組和慢病毒組，分別感染慢病毒空載體和慢病毒，CELIGO法檢測肝癌BEL7404細胞的生長速度；MTT法檢測細胞倍增速率；FACS法檢測細胞增殖周期和凋亡的變化。結果結果1、成功構建OLFML2A基因的RNAI慢病毒。2、人肝癌BEL7404細胞株成功被OLFML2A基因RNAI慢病毒感染，顯微鏡下綠色熒光，其感染效率達80；感染后OLFML2A基因MRNA水平顯著下降（P0006，P005），蛋白水平OLFML2A基因的表達明顯減少（P001），其敲減效率為686。3、BEL7404細胞感染慢病毒后相比慢病毒空載體組，慢病毒組的BEL7404細胞生長速率持續(xù)受到抑制P0001P＜005）；于細胞感染后第5天，慢病毒組G1期的細胞減少P＜005），處于S期的細胞數量無顯著變化，G2M期細胞顯著增多P＜005）；細胞感染后第3天，慢病毒組發(fā)生凋亡的細胞數量顯著增加P＜005）；MTT法檢測細胞增殖慢病毒組細胞增殖倍數明顯減小P＜005），差異均有統(tǒng)計學意義。結論結論OLFML2A基因RNAI慢病毒顯著抑制OLFML2A基因的表達，抑制人肝癌BEL7404細胞增殖，促進其凋亡，影響其細胞周期。

簡介：目的海洋褐藻中的褐藻多糖硫酸酯具有抗凝血、抗炎癥、抗腫瘤等多重生物活性，其潛在生物功效日益受到人們的高度重視，也成為近年海洋藥物研究的熱點之一。本實驗將進一步探討褐藻多糖硫酸酯對小鼠肝癌細胞生長和轉移行為的影響及對正常小鼠免疫細胞的影響，并探討其抗腫瘤作用的機理。方法1采用乙醇重沉淀法進一步提純褐藻多糖硫酸酯；采用硫酸苯酚法檢測所提樣品中的糖含量，采用DODGSON法測定硫酸基含量。2采用MTT法檢測褐藻多糖硫酸酯對HCAF肝癌細胞體外生長的影響；淋巴結體外粘附實驗、穿膜實驗、侵襲實驗檢測褐藻多糖硫酸酯對小鼠肝癌細胞粘附、遷移行為的影響。3采用明膠酶譜、ELISA等方法檢測褐藻多糖硫酸酯對肝癌細胞轉移相關蛋白表達水平的影響，RTPCR的方法檢測褐藻多糖硫酸酯對轉移相關蛋白MRNA表達水平的影響。4采用MTT法檢測褐藻多糖硫酸酯對正常小鼠脾淋巴細胞增殖的影響；巨噬細胞吞噬中性紅實驗檢測褐藻多糖硫酸酯對脾巨噬細胞吞噬活性的影響；ELISA法檢測褐藻多糖硫酸酯對脾細胞細胞因子分泌水平的影響。結果1得到褐藻多糖硫酸酯，測得其總糖含量為42％，硫酸基含量為12。2褐藻多糖硫酸酯對HCAF肝癌細胞體外生長有抑制作用，但抑制作用不明顯，褐藻多糖硫酸酯對肝癌細胞的粘附、遷移能力有明顯的抑制作用。3ELISA、明膠酶譜、WESTERNBLOT、RTPCR結果顯示，褐藻多糖硫酸酯可以下調基質金屬蛋白酶MMP2的蛋白和MRNA的表達。4褐藻多糖硫酸酯對脾淋巴細胞增殖、MΦ吞噬活性及細胞因子IL6、IL10、IL12、IL18和TNFΑ的分泌均有均有促進作用。結論褐藻多糖硫酸酯具有抗腫瘤和免疫調節(jié)的的活性。其抗腫瘤機理可能即通過提高機體細胞與分子免疫應答水平，調節(jié)細胞因子分泌；又可通過直接作用于腫瘤細胞，下調基質金屬蛋白酶MMP2的表達，抑制腫瘤轉移實現的。

簡介：目的探索小鼠甲狀腺來源間充質干細胞的生物學特性，比較其與骨實質來源間充質干細胞是否具有差異，為臨床研究自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機制提供理論與實驗依據。方法1、采用組織貼壁培養(yǎng)法，體外無菌分離并培養(yǎng)C57BL6小鼠甲狀腺來源間充質干細胞（THYROIDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，TMSCS），以小鼠骨實質來源間充質干細胞（BONEESSENCEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCS）作對照，通過倒置顯微鏡觀察貼壁細胞形態(tài)，然后利用不同誘導劑誘導貼壁細胞向成脂肪、成骨分化，油紅O染色檢測成脂分化能力，堿性磷酸酶及VONKOSSA染色檢測成骨分化能力，QPCR檢測相關成脂肪和成骨關鍵轉錄因子的表達。進一步，采用CCK8法檢測貼壁細胞生長曲線，流式細胞儀檢測細胞表型和細胞周期。2、在獲得小鼠甲狀腺來源MSCS的基礎上，采用淋巴母細胞轉化實驗（LYMPHOCYTETRANSFMATIONTEST，LTT和混合淋巴細胞反應（MIXEDLYMPHOCYTEREACTION，MLR檢測MSCS對T細胞增殖的免疫抑制功能。進一步，將甲狀腺來源MSCS與DC共培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài)改變，流式細胞術檢測DC表面抗原的表達，QPCR法在MRNA水平檢測促炎因子IFNΓ、TNFΑ和IL12的表達水平。3、建立異體鼠尾皮瓣移植模型，檢測甲狀腺來源MSCS體內免疫調節(jié)及修復受損組織的能力。將小鼠甲狀腺來源MSCS通過尾靜脈輸注模型小鼠體內，每日觀察移植皮瓣炎癥反應程度和愈合情況，第7天行病理學檢測移植皮瓣組織淋巴細胞浸潤程度。結果1、從小鼠甲狀腺和骨實質組織中均可培養(yǎng)出貼壁生長的成纖維樣的細胞，流式細胞儀檢測相關細胞表型，兩種細胞均陽性表達CD29、CD140、CD105和SCA1，而不表達CD34、CD45、CD31、CD11B和MHCII。進一步，將細胞向脂肪和骨細胞誘導分化，結果顯示，細胞可被誘導成脂肪，油紅染色可見有大量脂滴出現，QPCR檢測可見脂肪分化關鍵轉錄因子CEBPΑ和PPARΓ的表達；成骨誘導分化后，堿性磷酸酶染色可見堿性磷酸酶活性增高，VONKOSSA染色可見鈣化骨結節(jié)形成，QPCR檢測可見成骨關鍵轉錄因子RUNX2和OSTEOCALCIN的表達，說明成功獲得小鼠甲狀腺來源MSCS。利用CCK8法檢測甲狀腺來源MSCS的生長特性，結果顯示，細胞呈S型曲線生長，流式細胞術檢測細胞周期，可見80％以上細胞分布在G0G1期提示獲得的貼壁細胞符合干細胞的生長特性。2、在獲得TMSCS的基礎上，針對MSCS獨特的免疫調節(jié)功能進行LLT和MLR檢測。LTT檢測TMSCS對CONA刺激的T淋巴細胞增殖能力的影響，結果表明，TMSCS可有效抑制CONA刺激的T淋巴細胞增殖能力，且隨著TMSCS量的增加，其抑制作用顯著增強P＜005；利用異體淋巴細胞刺激的MLR實驗也得到相同的實驗結果，即MSCS抑制異體淋巴細胞抗原刺激的T細胞增殖能力隨著MSCS數量的增加，其抑制作用顯著增強P＜05。3、DC作為抗原遞呈細胞，在免疫調節(jié)中發(fā)揮重要作用，同時MSCS對DC功能也具有重要的調節(jié)作用。為此，我們在體外利用MSCS與DC共培養(yǎng)體系，觀察甲狀腺來源MSCS對DC功能的影響，結果顯示，與甲狀腺來源MSCS共培養(yǎng)的DC，其形態(tài)表現為細胞樹狀突起少而短；流式細胞儀檢測DC細胞表面抗原表達，可見CD11C、CD80、CD86和MHCII表達量均顯著下降；QPCR檢測相關促炎因子IFNΓ、TNFΑ和IL12MRNA的表達亦顯著下降P＜005。4、利用小鼠尾部皮瓣移植模型檢測甲狀腺來源MSCS的體內免疫調節(jié)功能和組織修復能力，結果表明，TMSCS與BMSCS相似，具有修復鼠尾皮瓣損傷的能力，皮瓣損傷愈合較對照組快。病理切片結果顯示，TMSC治療小鼠皮瓣組淋巴細胞浸潤程度較對照組低，提示TMSCS可有效促進皮瓣損傷愈合，減輕炎癥反應。結論1、成功分離獲得小鼠甲狀腺來源MSCS，其細胞形態(tài)、免疫表型、誘導分化能力和細胞增殖特性均與骨實質來源MSCS相似。2、通過體外LTT和MLR實驗結果表明，小鼠TMSCS具有免疫調節(jié)能力，在體外可抑制CONA和異種抗原刺激的T淋巴細胞的增殖，且具有明顯的劑量依賴性。同時，TMSCS對抗原遞呈細胞DC的免疫功能也具有調節(jié)作用，可顯著抑制DC的成熟。3、體內異體鼠尾皮瓣移植模型實驗結果表明，TMSCS可抑制移植術后產生的異體免疫排斥反應，誘導免疫耐受，對受損組織具有較強的修復能力，可以有效減輕炎癥反應及淋巴細胞浸潤程度。上述研究結果表明，小鼠甲狀腺來源MSCS具有與骨實質來源MSCS相似的生物學特性，為今后深入探討自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機制提供可靠的理論和實驗依據。

簡介：21博士學位論文博士學位論文MARVELD1影響肺癌細胞基本生物學特征的分子機制THEEFFECTOFMARVELD1ONMOLECULARMECHANISMOFBASICBIOLOGYACTERISTICSINLUNGCARCINOMA姚媛菲姚媛菲哈爾濱工業(yè)大學哈爾濱工業(yè)大學2015年12月23CLASSIFIEDINDEXQ71UDC57721DISSERTATIONFTHEDOCTDEGREEINENGINEERINGTHEEFFECTOFMARVELD1ONMOLECULARMECHANISMOFBASICBIOLOGYACTERISTICSINLUNGCARCINOMACIDATEYAOYUANFEISUPERVISPROFLIYUACADEMICDEGREEAPPLIEDFDOCTOFENGINEERINGSPECIALTYBIOMEDICALENGINEERINGAFFILIATIONSCHOOLOFLIFESCIENCETECHONOGYDATEOFDEFENCEDECEMBER2015DEGREECONFERRINGINSTITUTIONHARBININSTITUTEOFTECHNOLOGY

簡介：目的研究少突膠質細胞譜系基因髓鞘堿性蛋白GENESOFTHEOLIGODENDROCYTELINEAGEMYELINBASICPROTEIN，GOLLIMBP對T細胞胞內CA2及凋亡、增殖能力的影響，初步嘗試建立口腔扁平苔蘚ALLICHENPLANUS，OLP動物模型，從而為進一步研究OLP等免疫相關性疾病的病因及發(fā)病機制打下基礎。方法GOLLIMBP過表達慢病毒載體感染JURKAT細胞，采用實時熒光定量PCRQUANTITATIVEREALTIMEPCR，QPCR和免疫蛋白印記技術WESTERNBLOT，WB分析GOLLIMBPMRNA及蛋白表達情況CCK8法和ANNEXINⅤFITC7AAD雙熒光染色分別檢測JURKAT細胞增殖能力、凋亡能力采用鈣離子熒光探針FLUO3檢測JURKAT細胞內CA2濃度變化GOLLIMBP過表達慢病毒載體注射于敘利亞金黃地鼠頰囊黏膜下，HE染色觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織結構改變免疫組化法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織中增殖細胞核抗原PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN，PCNA的表達TUNEL法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織細胞凋亡情況。結果GOLLIMBP過表達慢病毒載體成功感染JURKAT細胞，感染后JURKAT細胞GOLLIMBPMRNA及蛋白表達升高GOLLIMBPOE組JURKAT細胞增殖能力顯著下降P＜001，凋亡能力也明顯下降P＜001GOLLIMBPOE組鈣離子內流顯著減小P＜001GOLLIMBP未能誘導實驗動物口腔黏膜產生肉眼可見的OLP病損變化HE染色未見OLP特征性組織學結構改變7天實驗組上皮層細胞凋亡率與對照組無明顯差異P＞005，14天實驗組上皮層細胞凋亡率低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0057天及14天實驗組上皮層細胞增殖率低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜005。結論GOLLIMBP過表達可抑制JURKAT細胞增殖、凋亡能力和抑制CA2內流，且能夠調控敘利亞金黃地鼠頰囊黏膜上皮細胞增殖和凋亡，但未能成功建立OLP動物模型。

簡介：授予單位代碼10089學號或申請?zhí)?0142003中國圖書分類號R73534學術學術學位學位DNMT3A在結直腸癌組織中的在結直腸癌組織中的表達表達及其及其對HCT116細胞株細胞株生物生物學功能的影響學功能的影響研究生唐宇杰唐宇杰導師師張學明張學明教授教授專業(yè)業(yè)外科學外科學二級學院二級學院唐山工人醫(yī)院唐山工人醫(yī)院2017年3月碩士學位論文HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要3英文縮寫6研究論文DNMT3A在結直腸癌組織中的表達及其對HCT116細胞株生物學功能的影響前言7材料與方法7結果16附圖18附表21討論23結論26參考文獻27綜述結直腸癌的表觀遺傳學31致謝57個人簡歷58

簡介：JJIIIIIIIIIIIIIIIIIIⅢY3336124分類號R71174密級公開單位代碼10422‘學號2014120095O_●、J、塞夠嘻矽_孫。夕≮JBSHANDONGUNIVERSITY博士學位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE’專業(yè)學僮論文題目I科羅索酸誘導富頸瘸綱髓瀾亡的釜黼學撬制研究THESTUDYOFAPOPTOSISBINOG，IICAL’M蛐A一N。ISMOFCOR，OSOLIE。?！?，“‘O。，ACIDTOCERVI髓LCAREINOMACELLS、作者姓’名培養(yǎng)單位專業(yè)名蠼旦赫4習、●一‘一Ⅺ，、徐永黼山東寒擎臨床醫(yī)嚳賦群二二坦趣肇～。二。師4Z卅TEL赫蛾7。?；述蔍墨A。；2叢J墨K二合作導師2Q喜7年“23日原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名至盤襤日期70F7一F|弓關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，一允許論文被查閱和借閱；本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名三塑茸導師簽名幽日期皇型鄉(xiāng)

簡介：樹突狀細胞DENDRITICCELLS，DCS是目前所知的機體內功能最強的專職性APC，能夠有效地攝取、加工及提呈抗原，通過其表面B7、MHCⅡ和ICAM1等分子的表達，刺激CD4T細胞的活化增殖，促進IL2的分泌，在雙信號刺激下，最終活化CD8T細胞，產生免疫應答效應。臍血中富含的CD34造血祖細胞與骨髓和外周血相比，數量更多，具有更強的增殖潛能，是DCS的理想來源。體外，不同細胞因子聯(lián)合可誘導CD34造血祖細胞分化為DCS，在腫瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面發(fā)揮效應。臍血CD34造血祖細胞來源的DCS分化發(fā)育和成熟經歷了一系列復雜而精細的調節(jié)過程，探討DCS分化發(fā)育、成熟過程的調節(jié)因素及其生物學功能，將有助于開展以DCS為佐劑的生物治療。本研究優(yōu)化了體外擴增、誘導CD34造血祖細胞產生DCS的方案，首次系統(tǒng)分析臍血CD34造血祖細胞來源DCS分化成熟過程中共刺激分子的表達及其相互作用，比較CD40、TNFΑ和41BBL三條信號途徑對DCS分化成熟和生物學功能的影響，探討臍血貼壁細胞來源DCS相關抗原和共刺激分子的表達及其生物學功能，以期擴大DCS的來源，通過干預CD40CD40L、41BB41BBL、PD1PDL1PDL2等幾對重要的共刺激分子來調節(jié)臍血衍生的DCS生物學功能，為腫瘤免疫和移植免疫的臨床應用提供實驗和理論依據。第一部分臍血CD34造血祖細胞體外誘導樹突狀細胞的優(yōu)化方案第二部分臍血CD34造血祖細胞來源樹突狀細胞的生物學特性第三部分臍血貼壁細胞來源的樹突狀細胞共刺激分子表達及其

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簡介：目的探討MIR150在早期內皮祖細胞及晚期內皮祖細胞的表達含量；探討MIR150對EPCS的分化、血管形成等生物學作用；探討MIR150是否通過調控靶基因CMYB來調控EPCS的分化。方法1密度梯度離心法獲取人外周血來源的單個核細胞（PBMCS），借助差速貼壁法和EPCS專用培養(yǎng)基定向誘導培養(yǎng)EPCS并培養(yǎng)1428天，光學顯微鏡下觀察EPCS的細胞形態(tài)變化，應用流式細胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬實驗鑒定細胞表型，實時定量PCR測定MIR150在早期內皮祖細胞及晚期內皮祖細胞中的表達含量；2MIR150的模擬物和抑制物分別轉染EEPCS和LEPCS，檢測MIR150對EEPCS和LEPCS的分化、增殖、成血管能力的影響；3探查MIR150的可能靶基因CMYB，PCR技術檢測MRNA的表達；WESTERNBLOT檢測靶蛋白的表達變化。結果1密度梯度離心法獲得人外周血來源MNCS經體外培養(yǎng)后，表達相應的內皮細胞特異抗原，包括CD31、CD133、VWF、VEGFR2，能夠吞噬DILACLDL與UEA1結合，具有增殖和成血管能力，細胞純度較高；2使用MIR150模擬物和抑制物轉染EPCS48小時后，證實MIR150能夠調控EEPCS和LEPCS的表面特異性抗原的表達水平，上調MIR150可以促進EEPCS的分化；下調MIR150可以降低LEPCS的成血管及增殖能力；3MIR150表達上調后EPCS中CMYB蛋白合成減少（P結論MIR150在EEPCS和LEPCS表達含量不同；調控MIR150表達能夠影響EPCS的增殖、分化、成血管能力，CMYB可能是MIR150的靶基因。

簡介：分類號R7255密級單位代碼10422博士學位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE論文題目白血病來源LSCS和CD耵淋巴細胞對BMMSCS生物學特性的影響及其機制研究THEROLEANDMECHANISM0FLEUKEBIADERLVEDLSOSANDCD4TCELLSINB10LOGYBEHAVL0骼0FBMMSCS作者培養(yǎng)專業(yè)指導合作姓名單位名稱教師導師于臻醫(yī)學院兒科學血液鞠秀麗教授2016年4月29日∞曬～番一學力一≯樂；LD聲N，∥姒山東大學博士學位論文目錄中文摘要1英文摘要7符號說明13前言15第一部分白血病干細胞對BMMSC生物學特性的影響及其機制研究20材料和方法20結果30討論一32第二部分AML患者CD4T淋巴細胞對BMMSC形態(tài)特征和增殖的影響及其機制研究39材料和方法39結果45討論。47結論54附圖表55參考文獻66綜述80致謝91攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄～92附英文論文93

簡介：目的探討沉默EN2對人腎小管上皮細胞（HK2細胞株）生物學行為的影響。方法利用慢病毒載體介導沉默人腎小管上皮細胞HK2細胞株EN2基因的表達，轉染并篩選穩(wěn)定低表達EN2基因的人腎小管上皮細胞HK2細胞株，以LVSHEN2為實驗組、LVSHCON為空載組、CONTROL為空白對照組。RTQPCR和WESTERNBLOT分別檢測EN2MRNA和蛋白的表達水平，MTT檢測HK2細胞增殖能力，流式細胞術檢測細胞周期和凋亡，TRANSWELL實驗檢測細胞侵襲能力，細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力。結果設計與EN2互補的DNA序列，合成SHRNAEN2并克隆到慢病毒載體，同時設計非特異性SHRNA生成的載體作為陰性對照。轉染HK2細胞后，篩選獲得穩(wěn)定低表達EN2基因的HK2細胞株。RTQPCR分析顯示EN2MRNA在LVSHCON組2ΔΔCT107±007CONTROL組2ΔΔCT1±014中的表達分別是LVSHEN2組2ΔΔCT058±002的19倍和17倍。WESTERNBLOT檢測各組灰度值LVSHEN2組257665。LVSHCON組161926，CONTROL組147885。提示轉染成功。MTT法分析結果采用單因素方差分析顯示三組細胞OD值差別（F478。P001）有統(tǒng)計學意義。與兩對照組細胞比較，LVSHEN2組細胞OD值升高，提示抑制EN2蛋白可促進人腎小管上皮細胞HK2細胞的增殖活性。流式細胞儀檢測顯示LVSHEN2組相對于兩對照組，細胞凋亡率下降。LVSHEN2實驗組、LVSHCON空載組、CONTROL空白對照組HK2細胞凋亡比例分別為979％，2498和249。與兩對照組細胞比較，LVSHEN2組細胞早期凋亡率和晚期凋亡率均下降，提示抑制EN2基因表達可減少HK2細胞凋亡。細胞穿膜實驗顯示LVSHEN2實驗組、LVSHCON空載組、CONTROL空白對照組HK2細胞穿膜細胞數分別為185±562，05±112和05±076，單因素方差分析顯示LVSHEN2實驗組穿膜細胞數與兩對照組之間不同（F1935。P000），說明下調EN2蛋白可提高人腎小管上皮細胞HK2的侵襲能力。細胞劃痕試驗各組0H，6H，12H和24H劃痕寬度采用單因素方差分析，結果顯示各組細胞遷移能力差別無統(tǒng)計學意義（P005）。結論下調HK2細胞株EN2基因的表達促進HK2細胞增殖、抑制細胞凋亡、提高細胞侵襲能力對細胞遷移能力無明顯影響。