miR-150調(diào)控內(nèi)皮祖細胞分化等生物學功能的研究.pdf

1、目的：探討 miR-150在早期內(nèi)皮祖細胞及晚期內(nèi)皮祖細胞的表達含量；探討miR-150對EPCs的分化、血管形成等生物學作用；探討miR-150是否通過調(diào)控靶基因c-Myb來調(diào)控EPCs的分化。
　　方法：1.密度梯度離心法獲取人外周血來源的單個核細胞（PBMCs），借助差速貼壁法和EPCs專用培養(yǎng)基定向誘導培養(yǎng)EPCs并培養(yǎng)14~28天，光學顯微鏡下觀察EPCs的細胞形態(tài)變化，應(yīng)用流式細胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬

2、實驗鑒定細胞表型，實時定量PCR測定miR-150在早期內(nèi)皮祖細胞及晚期內(nèi)皮祖細胞中的表達含量；2.miR-150的模擬物和抑制物分別轉(zhuǎn)染eEPCs和lEPCs，檢測miR-150對eEPCs和lEPCs的分化、增殖、成血管能力的影響；3.探查miR-150的可能靶基因c-Myb，PCR技術(shù)檢測mRNA的表達；Western Blot檢測靶蛋白的表達變化。
　　結(jié)果：1.密度梯度離心法獲得人外周血來源MNCs經(jīng)體外培養(yǎng)后，表達相應(yīng)

3、的內(nèi)皮細胞特異抗原，包括CD31、CD133、vWF、VEGFR-2，能夠吞噬Dil-acLDL與UEA-1結(jié)合，具有增殖和成血管能力，細胞純度較高；2.使用miR-150模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染EPCs48小時后，證實miR-150能夠調(diào)控eEPCs和lEPCs的表面特異性抗原的表達水平，上調(diào)miR-150可以促進eEPCs的分化；下調(diào)miR-150可以降低lEPCs的成血管及增殖能力；3.miR-150表達上調(diào)后EPCs中c-Myb蛋白合