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文檔簡介
1、摘要II摘要目的:目的:1、檢測OLFML2A基因在肝癌細胞株中的表達;2、構建OLFML2A基因的RNAi慢病毒;3、檢測OLFML2ARNAi慢病毒感染肝癌BEL7404細胞后,細胞的增殖、細胞周期及凋亡的變化,初步明確OLFML2A基因對肝癌細胞生物學行為的影響。方法:方法:1、構建OLFML2A基因RNAi慢病毒;2、采用熒光顯微鏡觀察GFP綠色熒光來確定感染效率,通過RTqPCR及Westernbolt等分析感染慢病毒后OLF
2、ML2A基因表達的變化;3、對數(shù)生長期的BEL7404細胞株分為兩組:慢病毒空載體組和慢病毒組,分別感染慢病毒空載體和慢病毒,Celigo法檢測肝癌BEL7404細胞的生長速度;MTT法檢測細胞倍增速率;FACS法檢測細胞增殖周期和凋亡的變化。結果:結果:1、成功構建OLFML2A基因的RNAi慢病毒。2、人肝癌BEL7404細胞株成功被OLFML2A基因RNAi慢病毒感染,顯微鏡下綠色熒光,其感染效率達80%;感染后OLFML2A基因
3、mRNA水平顯著下降(p=0.006,p0.05),蛋白水平OLFML2A基因的表達明顯減少(p0.01),其敲減效率為68.6%。3、BEL7404細胞感染慢病毒后:相比慢病毒空載體組,慢病毒組的BEL7404細胞生長速率持續(xù)受到抑制(p=0.001p<0.05);于細胞感染后第5天,慢病毒組G1期的細胞減少(p<0.05),處于S期的細胞數(shù)量無顯著變化,G2M期細胞顯著增多(p<0.05);細胞感染后第3天,慢病毒組發(fā)生凋亡的細胞數(shù)
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