miR-129-5p對脂肪細(xì)胞增殖、分化及棕色化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、MicroRNA在脂肪的各個進(jìn)程中都發(fā)揮著重要作用，包括脂肪細(xì)胞的增殖、分化以及棕色化。MiR-129-5p是一個重要的腫瘤抑制因子，它對很多癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用。中南大學(xué)關(guān)于miRNA的微陣列分析表明miR-129-5p在胰島素抵抗的3T3細(xì)胞中高表達(dá)，預(yù)示著miR-129-5p可能在脂肪細(xì)胞中發(fā)揮作用。本文旨在探索miR-129-5p在脂肪細(xì)胞增殖、分化及棕色化過程中發(fā)揮的作用。
　　本文使用miR-129-5p mimi

2、c轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞系和小鼠原代皮下脂肪細(xì)胞，并使用EdU、流式細(xì)胞術(shù)、CCK-8、油紅O染色、Bodipy染色、RT-qPCR、Western blot等技術(shù)檢測過表達(dá)miR-129-5p對脂肪細(xì)胞增殖、分化及棕色化的影響。同時構(gòu)建了miR-129-5p靶基因G3BP1的熒光素酶報告載體，對miR-129-5p調(diào)控3T3增殖的機(jī)制進(jìn)行探索。獲得的主要結(jié)果如下:
　　1.在人、小鼠、大鼠等物種間miR-129-5p的成熟序列及種子序列

3、一致;miR-129-5p在小鼠腦、皮下白色脂肪、棕色脂肪中表達(dá)較高，且其表達(dá)水平在脂肪細(xì)胞增殖期間呈下降趨勢，在分化期間呈升高趨勢。
　　2.過表達(dá)miR-129-5p可以影響cyclin D及p27等細(xì)胞周期相關(guān)基因的mRNA及蛋白水平表達(dá);miR-129-5p顯著減少了處于細(xì)胞周期S期的細(xì)胞數(shù)目同時顯著增加了處于細(xì)胞周期G2期的細(xì)胞數(shù)目并造成G2期阻滯;過表達(dá)miR-129-5p在分子水平和細(xì)胞水平上顯著抑制了3T3前體脂肪

4、細(xì)胞的增殖過程。
　　3.過表達(dá)miR-129-5p顯著抑制了G3BP1基因mRNA及蛋白水平的表達(dá);miR-129-5p直接靶定G3BP1基因的3'UTR區(qū)域;過表達(dá)miR-129-5p顯著升高了p38的蛋白水平及磷酸化水平表達(dá);miR-129-5p是通過靶定G3BP1并影響下游p38信號通路發(fā)揮其抑制3T3前體脂肪細(xì)胞增殖作用的。
　　4.過表達(dá)miR-129-5p后成脂相關(guān)基因PPARγ、CEBPα及aP2的mRNA及

5、蛋白水平的表達(dá)沒有發(fā)生變化;miR-129-5p沒有影響脂滴的形成及數(shù)量;miR-129-5p過表達(dá)不影響脂肪細(xì)胞分化過程。
　　5.羅格列酮法誘導(dǎo)小鼠脂肪細(xì)胞棕色化后棕色脂肪標(biāo)志基因UCP1及Cidea的表達(dá)明顯升高。過表達(dá)miR-129-5p使棕色脂肪標(biāo)志基因UCP及PGC1-α的mRNA和蛋白水平表達(dá)顯著降低;過表達(dá)miR-129-5p在分子水平上抑制了脂肪細(xì)胞棕色化過程。
　　綜上所述，miR-129-5p可以通過靶