Icariin調(diào)控脂肪干細(xì)胞增殖及成骨分化的作用機(jī)制及應(yīng)用研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 Icariin對脂肪干細(xì)胞(ASCs)的增殖和成骨分化的影響
　　目的:
　　探究活性小分子淫羊藿苷(icariin)是否具有促進(jìn)脂肪干細(xì)胞(ASCs)的增殖和成骨分化的潛能,并確定其促ASCs增殖和分化的最適濃度,為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)
　　方法:
　　1、分離大鼠脂肪組織,I型膠原酶消化分解法獲得ASCs
　　2、不同濃度的 icariin(0mol/L

2、10-8mol/L10-7mol/L10-6mol/L10-5mol/L)干預(yù)脂肪干細(xì)胞,用CCK8PCRWESTREN BLOT等方法檢測其對ASCs增殖的影響
　　3、不同濃度的 icariin(0mol/L10-8mol/L10-7mol/L10-6mol/L10-5mol/L)干預(yù)脂肪干細(xì)胞,檢測其對ASCs成骨相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　結(jié)果:
　　1、分離的ASCs形態(tài)均一,呈長梭形并有多個觸手伸出
　　

3、2、CCK8PCRWESTREN BLOT方法檢測發(fā)現(xiàn)icariin對ASCs促增殖作用具有濃度依賴性,在10-7mol/L效果最好
　　3、RT-PCR檢測成骨相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn),icariin能夠促進(jìn)成骨相關(guān)基因的表達(dá),且對分化的影響具有濃度依賴性
　　結(jié)論:
　　icariin可促進(jìn)ASCs增殖和成骨分化,效果與藥物濃度相關(guān)
　　第二部分 Icariin影響脂肪干細(xì)胞YAP表達(dá)和亞細(xì)胞定位
　　目的:

4、
　　探究icariin促進(jìn)ASCs的增殖和成骨分化的分子機(jī)制
　　方法:
　　1、研究icariin對ASCs中YAP的胞核和胞質(zhì)定位的影響
　　2、研究不同濃度的 icariin(0mol/L10-8mol/L10-7mol/L10-6mol/L10-5mol/L)對YAP及其下游相關(guān)基因的表達(dá)的影響
　　3、最適濃度的icariin干預(yù)ASCs不同的時間,探究icariin對YAP的磷酸化及其下游基因

5、的表達(dá)情況
　　結(jié)果:
　　1、熒光顯微鏡觀察顯示icariin干預(yù)組中YAP的表達(dá)和胞核聚集明顯增加對照組的YAP也主要聚集在胞核之中
　　2、Icariin對 ASCs的 YAP通路的影響與濃度相關(guān)在10-7M濃度時 YAPTAZ及其下游CTGF表達(dá)最高,濃度高于10-7M時表達(dá)反而下降
　　3、Icariin可使YAP去磷酸化
　　結(jié)論:
　　icariin可促進(jìn)YAP的表達(dá)和去磷酸化,使YAP

6、胞核聚集而引起下游基因的表達(dá)
　　第三部分 Icariin誘導(dǎo)三維立體培養(yǎng)的ASCs在大鼠骨缺損的修復(fù)中的研究
　　目的:
　　研究icariin與生物玻璃中三維培養(yǎng)的ASCs在大鼠顱骨極量骨缺損模型的修復(fù)中的效果
　　方法:
　　1、在大鼠顱骨頂制做直徑為8mm的極量骨缺損模型
　　2、生物玻璃作(BG)為生物支架材料,與 ASCs混合培養(yǎng),然后在體外用 icariin干預(yù)
　　3、將icar