miR-328對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的:
　　構(gòu)建miR-328過(guò)表達(dá)及下調(diào)表達(dá)的真核表達(dá)載體，探討miR-328對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病(CML)急變期細(xì)胞株K562細(xì)胞增殖的影響及作用機(jī)制。
　　方法:
　　構(gòu)建miR-328過(guò)表達(dá)及下調(diào)表達(dá)的真核表達(dá)載體hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibition，核苷酸測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒，利用脂質(zhì)體lipofectamineTM2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至K562細(xì)胞；通過(guò)熒光顯微

2、鏡觀察各組K562細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況；通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組K562細(xì)胞中miR-328、C/EBP mRNA的表達(dá)水平；CCK-8檢測(cè)各組K562細(xì)胞增殖的情況；Western-Blot方法檢測(cè)各組K562細(xì)胞中C/EBPα蛋白表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:
　　1.成功構(gòu)建重組真核表達(dá)載體：hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibition；
　　2.將載體轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞，24h后在熒光顯微鏡下可

3、見(jiàn)熒光細(xì)胞，表明重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入K562細(xì)胞，48h、72h后可見(jiàn)熒光細(xì)胞數(shù)逐漸增多；
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對(duì)照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibition組相比，hsa-miR-328組的miR-328呈現(xiàn)明顯表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.001）；
　　4. CCK-8方法檢測(cè)結(jié)果顯示與空白對(duì)照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibitio

4、n組相比，has-miR-328組的K562細(xì)胞的增殖明顯受抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.001）；
　　5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對(duì)照組、Lip2000組、空載體組，hsa-miR-328-inhibition組相比，has-miR-328組的K562細(xì)胞中C/EBPαmRNA表達(dá)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；
　　6.Western-Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)has-miR-328組的K562細(xì)胞中C/