黃芩苷對(duì)白血病細(xì)胞株K562增殖、凋亡的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的: ①研究黃芩苷(Baicalin)對(duì)人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞增殖、凋亡的影響。 ②觀察黃芩苷對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響，探討其作用機(jī)制。 ③黃芩苷作用后對(duì)K562細(xì)胞PI3K/Akt、MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)的變化。 方法: 應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃芩苷對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響；AO/EB熒光染色、DNA片段

2、化分析、Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)及TdT酶介導(dǎo)的末端缺失原位標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)黃芩苷對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響：RT-PCR法檢測(cè)黃芩苷作用前后K562細(xì)胞bcr/abl、c-myc、Bcl-2、Bax、h-tert基因mRNA表達(dá)的影響：蛋白印跡法(Western blotting)檢測(cè)黃芩苷對(duì)K562細(xì)胞bcr/abl融合蛋白P210、磷酸化p210、c-myc、Bc1-2、procaspase-3、procaspa

3、se-9、PARP蛋白表達(dá)的影響及黃芩苷作用后K562細(xì)胞P13K/Akt、MAPK/ERK信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果: 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃芩苷能有效抑制K562細(xì)胞的增殖，作用48小時(shí)的IC50約為15μmol·L-1；AO/EB熒光染色、Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)、DNA片段化的檢出及TdT酶介導(dǎo)的末端缺失原位標(biāo)記(TUNEL)法證實(shí)黃芩苷能誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，隨藥物作用濃度的增

4、加，凋亡率也漸上升。 (2)黃芩苷下調(diào)K562細(xì)胞bcr/abl、c-myc、Bcl-2、h-tert、bcr/abl基因mRNA的表達(dá)：也下調(diào)了K562細(xì)胞c-myc、Bcl-2、P210、磷酸化p210(P-P210)蛋白的表達(dá)，上調(diào)Bax基因mRNA的表達(dá)。Western blotting的結(jié)果顯示procaspase-3、procaspase-9、116KD的PARP蛋白表達(dá)水平下降，而PARP蛋白的85KD裂解活性片段

5、逐漸升高，說明黃芩苷通過線粒體途徑介導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡；黃芩苷下調(diào)K562細(xì)胞Akt、MAPK信號(hào)通路蛋白Akt、p-Akt、IkB-α、p-IkB-α、p65、p-p65、mTOR、p-GSK-3β、MAPK(42/44)、p-MAPK(42/44)的表達(dá)，上調(diào)BAD蛋白的表達(dá)，而GSK-3β無明顯變化。 結(jié)論: (1)黃芩苷能有效抑制K562細(xì)胞增殖，通過線粒體途徑誘導(dǎo)其凋亡，在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。并可能通