免疫分析法在抗生素和蛋白質(zhì)檢測中的應用研究.pdf

1、近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，獸藥的種類劇增且使用范圍逐漸擴大，隨之而來的動物源性食品中獸藥殘留問題嚴重威脅人類的健康，成為亟待解決的重要課題。蛋白質(zhì)在生命活動過程中扮演著不可替代的角色，可作為生理功能處于正?；虿±頎顟B(tài)的客觀評價指標物，復雜生物樣品中蛋白質(zhì)的分離與檢測是蛋白質(zhì)組學、診斷學及基因?qū)W等生命科學研究領域的關鍵技術。實際樣品中獸藥殘留和蛋白質(zhì)的分離與檢測都面臨著目標化合物含量低、樣品基質(zhì)復雜等挑戰(zhàn)，因此，探索和發(fā)展快速高效的檢

2、測獸藥殘留和蛋白質(zhì)的方法十分必要。
　　免疫分析法是一類以抗原-抗體之間特異性親和結合為基礎而建立的分析方法，該類方法具有特異性強、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)良特性，已廣泛應用于食品監(jiān)測、藥物檢測、疾病診斷等領域中目標化合物的分離與檢測。本文基于免疫分析法，建立了用于檢測卡那霉素的生物素-親和素放大酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA)和用于分離與富集牛血清白蛋白(BSA)的磁免疫親和萃取-熒光光譜法(MIAE-FSA)。具體研究內(nèi)容如下

3、:
　　(1)制備了卡那霉素多克隆抗體，以生物素-親和素放大系統(tǒng)為基礎建立了BA-ELISA法，用于牛奶和蜂蜜中卡那霉素的檢測。利用單因素分析法對BA-ELISA的實驗條件進行了一系列的考察與優(yōu)化。在最佳實驗條件下，方法的線性范圍為0.3-30 ng mL-1，檢測限和定量限分別為0.07 ng mL-1和0.22 ng mL-1，IC50值為6.48 ng mL-1，對四種卡那霉素類似物的交叉反應率均小于1％。將BA-ELISA

4、法應用于牛奶和蜂蜜實際樣品中卡那霉素的分析檢測，回收率介于91.0％和103.3％之間。將該BA-ELISA法的測定結果與LC-MS/MS法進行對比，兩種方法呈現(xiàn)出較好的相關性(R2＞0.99)。上述結果表明，該方法展現(xiàn)出特異性強、靈敏度高和準確性好等優(yōu)勢，適用于牛奶和蜂蜜實際樣品中卡那霉素的檢測;
　　(2)制備了BSA多克隆抗體，建立了MIAE-FSA法，用于人血清樣品基質(zhì)中BSA的檢測。實驗通過水熱法、溶膠-凝膠法和戊二醛偶

5、聯(lián)法成功制備了具有核殼結構的免疫磁球（IMMs），將其作為MIAE吸附劑用于BSA的分離與富集，并用FS進行檢測。考察并優(yōu)化抗體固定化條件，制備的IMMs具有良好的分散性、穩(wěn)定性和磁響應性，抗體在磁球表面的最大固載量為32.2 mg g-1。通過優(yōu)化MIAE條件，該方法對目標蛋白質(zhì)的最大吸附量為107.7μg g-1，IMMs重復使用10次后，萃取效率保留了80％以上。將該方法應用于人血清樣品基質(zhì)中BSA的分離與檢測，回收率大于89.3