mba論文諾西肽新型產(chǎn)生菌株游動(dòng)放線菌的初步鑒定及其核糖體工程選育pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文諾西肽新型產(chǎn)生菌株游動(dòng)放線菌的初步鑒定及其核糖體工程選育姓名：趙文婷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師：胡昌華20100501西南大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要謝產(chǎn)物生物合成調(diào)控系統(tǒng)，從而使得菌株產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物的能力大幅度提高或是產(chǎn)生以前母本菌株原本不產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，相比于以往的隨機(jī)突變及理性篩選，該方法達(dá)到了事半功倍的效果，在微生物遺傳育種方面顯示了良好的應(yīng)用前景。首先，根據(jù)形態(tài)特征觀察，細(xì)胞壁脂肪酸成分分

2、析，并結(jié)合1 6 sr D N A 系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)菌株I M B 0 0 7 進(jìn)行了分類鑒定。細(xì)胞壁成分分析表明該菌株脂肪酸成分主要為1 6 碳的飽和脂肪酸，符合游動(dòng)放線菌的2 型特征。1 6 sr D N A 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建也證實(shí)了該菌株與游動(dòng)放線菌A c t i n o p l a n e s - s p ．0 3 ．7 2 3 ．1 5 s - r i b 的親緣性最高。其次，我們采用核糖體工程技術(shù)對(duì)該菌種進(jìn)行遺傳改良，首輪分別

3、用2 倍M I C 值的鏈霉素和利福平進(jìn)行單一抗性篩選，得到發(fā)酵單位提高1 ．9 9 倍的鏈霉素抗性突變株$ 6 3 以及發(fā)酵單位提高1 ．8 9 倍的利福平抗性突變株R 5 9 。第二輪組合鏈霉素和利福平進(jìn)行2 倍M I C 抗性篩選，得到突變菌株S R - 1 4 ，發(fā)酵單位達(dá)到原始菌株的7 ．9 倍。最后，經(jīng)過(guò)4 輪傳代考察，該菌株的發(fā)酵性能仍能保持穩(wěn)定。以上結(jié)果表明，突變株S R ．1 4 發(fā)酵產(chǎn)諾西肽水平相比原始菌株有顯著提高

4、，并且遺傳性能穩(wěn)定，具有一定的應(yīng)用前景。同時(shí)也表明核糖體工程相對(duì)于隨機(jī)誘變和簡(jiǎn)單的理性篩選來(lái)說(shuō)應(yīng)用于游動(dòng)放線菌的遺傳改良是可行的，且該方法簡(jiǎn)單易行，成本較低，利于推廣。本課題首次在游動(dòng)放線菌中報(bào)道諾西肽的產(chǎn)生，也是首次將核糖體工程技術(shù)應(yīng)用于諾西肽產(chǎn)生菌的菌株改良上。本研究為諾西肽這一重要的噻唑肽類抗生素的開(kāi)發(fā)提供了新的資源，拓寬了核糖體工程技術(shù)應(yīng)用的范圍，同時(shí)也為核糖體工程技術(shù)在稀有放線菌的遺傳改良提供了方法借鑒。關(guān)鍵詞：噻唑肽類抗生素