魔芋軟腐病拮抗放線菌的分離、鑒定及其應(yīng)用的初步研究.pdf

1、本課題從魔芋根際土壤中分離篩選魔芋軟腐病拮抗放線菌,并對(duì)其中的一株放線菌SJK18進(jìn)行菌種鑒定、培養(yǎng)優(yōu)化、主要抑菌代謝產(chǎn)物分離與結(jié)構(gòu)鑒定,同時(shí)用拮抗放線菌與魔芋內(nèi)生細(xì)菌、解磷真菌和固氮細(xì)菌等制成復(fù)合微生物菌劑應(yīng)用于魔芋盆栽和田間生防試驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)從魔芋根際土壤中分離得到11株魔芋軟腐病拮抗放線菌,通過(guò)復(fù)篩,篩選出對(duì)魔芋軟腐病有顯著拮抗作用的放線菌SJK18。此外,SJK18還能夠拮抗4種水稻白葉枯病原細(xì)菌;其對(duì)

2、四種稻瘟病原菌(65A、1073-2、1366和IK81-3)、馬鈴薯干腐病原菌、番茄早疫病原菌、蘋果炭疽病原菌和梨腐爛病原菌等病原真菌也有拮抗作用,抑菌率分別為62.2％、73.3％、62.5％、68.3％、49.1％、60.0％、66.4％和46.6％。
　　(2)采用傳統(tǒng)分類方法和現(xiàn)代分子分類方法,并結(jié)合其代謝活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,對(duì)菌株SJK18進(jìn)行了分類鑒定。結(jié)果表明,SJK18為弗氏鏈霉菌Streptomyces frad

3、iae中一個(gè)新的亞種。對(duì)該菌的16S rRNA基因序列和基因16S-23S rRNA序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行了注冊(cè),序列號(hào)分別為JN256680和JN381162。
　　(3)考察了SJK18產(chǎn)孢培養(yǎng)條件,得出其在35℃、pH6.0時(shí)更有利于產(chǎn)孢子;其最適產(chǎn)孢培養(yǎng)基配方為蛋白胨0.2％,NaCl0.3％,牛肉膏0.3％。
　　(4)以SJK18發(fā)酵液的抑菌活性為指標(biāo),以高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基為發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基,通過(guò)單因素實(shí)

4、驗(yàn),確定SJK18最適發(fā)酵條件為:發(fā)酵時(shí)間為7d,溫度30℃,轉(zhuǎn)速160rpm,接種量0.4％,發(fā)酵初始pH6.0,碳源為玉米粉,氮源為KNO3。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn),得出SJK18最適發(fā)酵抑菌培養(yǎng)基為:玉米粉2.5％、KNO30.1％、NaCl0.2％、KH2PO40.04％、MgSO4·7H2O0.04％、微量元素1mL/L。
　　(5)通過(guò)乙醇沉淀,濃縮,結(jié)晶,從SJK18在高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基的發(fā)酵液中分離出其主要抑菌活性成分,并通

5、過(guò)IR、NMR和TLC分析,鑒定該成分為苯酚。
　　(6)在魔芋盆栽試驗(yàn)中,以6種菌劑(1:SJK18;2:SJK4;3:SJK5;4:SJK10;5:混合拮抗放線菌;6:混合拮抗放線菌、內(nèi)生細(xì)菌、解磷真菌和固氮細(xì)菌)處理的魔芋葉子未發(fā)病,而空白處理的魔芋葉子發(fā)病面積為13.3％。與空白對(duì)照相比,6種菌劑均能促進(jìn)魔芋葉子的生長(zhǎng)和增加魔芋球莖濕重和干重;6種菌劑處理的魔芋,其葡甘聚糖含量分別提高了9.50％、4.25％、21.22％