稀有放線菌的篩選及新種鑒定.pdf

1、隨著不斷開發(fā)和利用放線菌資源，稀有放線菌逐漸成為產(chǎn)生抗生素的良好來源，很多研究者把目光轉(zhuǎn)向了稀有放線菌分離上。本實(shí)驗(yàn)旨在從土壤中篩選出對多種植物病原真菌及細(xì)菌有抑制作用的稀有放線菌，對菌株發(fā)酵液粗提物進(jìn)行抑菌活性測定，以尋找產(chǎn)生新抗生素的菌種來源，并對形態(tài)特別的菌株進(jìn)行鑒定。本實(shí)驗(yàn)采用3種分離培養(yǎng)基(添加荼啶酮酸20 mg/L和放線菌酮50 mg/L)，分別為GYEA培養(yǎng)基、LSV-SVF培養(yǎng)基及HV培養(yǎng)基。采用5種不同篩選方法對取自黑

2、龍江省、內(nèi)蒙古、廣東省等共9份土樣進(jìn)行篩選分離，共分離得到102株放線菌。采用管碟法測定放線菌的發(fā)酵液粗提物進(jìn)行抑細(xì)菌活性，實(shí)驗(yàn)得到有16株菌藤黃微球菌和枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑大于15 mm，其中4株菌對以上兩種細(xì)菌的抑菌圈直徑均在大于25 mm，分別為N1(1)、N2(5)、M2馬和A1，且其中有3株菌對藤黃微球菌的抑菌圈高達(dá)30 mm，分別為N1(1)、N2(5)和A1；采用十字交叉法對102株放線菌進(jìn)行了抑制6種真菌實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)得

3、到27株菌至少對2種真菌有明顯的抑菌作用，7株菌對5種真菌有明顯的抑制作用，分別N1(1)、N1(5)、H2小、H3小、M2馬、A1和A4。
　　 本研究采用小單孢菌分離方法得到的6株與小單孢菌科描述極為相似的菌株，它們分別為菌株M2、C2、N1、G2、1-15和L5，我們對其進(jìn)行16S rRNA測序，將測序結(jié)果與GenBank中的16S rRNA序列作初步的比對，其中C2、M2、G2和1-15這4株菌的相似性最高菌株均是Mic

4、romonospora chokoriensis strain2-19(6)T，其中與Micromonospora chokoriensis strain2-19(6)T相似性分別為C2(99.7％)，M2(99.7％)，G2(99.5％)，和1-15(99.2％)，但它們在ISP3培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)卻是明顯不同的，由此初步推斷這4株菌可能是不同種。菌株L5與小單孢菌科已發(fā)表的菌種16S rRNA序列相似性相對較低，其同相似性最高菌株分

5、別為Micromonospora olivasterospora MK-70T(98.38％)，Jishengella endophytica202201T(98.35％)，Micromonospora rhizosphaerae211018T(98.11％)，Micromonosporayangpuensis FXJ6.011T(98.04％)。但菌株L5與其相似性最高的菌種Micromonospora olivasterospora