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1、植物內(nèi)生放線菌是定殖于植物組織中不會擾亂植物的生長發(fā)育的一類放線菌。雖然同樣是存活于植物體內(nèi),但植物內(nèi)生放線菌卻并非病原菌。實驗表明,很多內(nèi)生菌有益于植物的生長繁殖。這是因為內(nèi)生旅線菌是一類產(chǎn)生多種活性次級代謝產(chǎn)物的原核微生物,這些次級代謝產(chǎn)物能夠抑制病原菌的繁殖,促進(jìn)植物生長,從而提高植物的存活率。植物內(nèi)生放線菌也因此受到各國微生物學(xué)家,生態(tài)學(xué)家,農(nóng)業(yè)專家們的青睞。其產(chǎn)生的活性物質(zhì)可廣泛應(yīng)用于制藥業(yè),農(nóng)業(yè),化工業(yè),畜牧業(yè)等行業(yè)。石竹,
2、又稱瞿麥,在中國被用作藥用植物已有近千年的歷史。石竹能合成多種活性天然物質(zhì)。目前石竹內(nèi)生放線菌的研究還尚屬空白。因此研究石竹內(nèi)生放線菌意義非凡。
本實驗致力于調(diào)查中國傳統(tǒng)藥用植物石竹內(nèi)生放線菌多樣性和分布情況,與此同時對其中的內(nèi)生放線菌進(jìn)行抗病原真菌細(xì)菌實驗,對其產(chǎn)活性物質(zhì)潛力進(jìn)行評估。從四株不同生境條件下的石竹根莖葉部位共分離到64株內(nèi)生放線菌。研究發(fā)現(xiàn),不同植物組織,不同篩選培養(yǎng)基,分離情況也有所不同。石竹內(nèi)根部內(nèi)生放線菌
3、數(shù)量最多。HV培養(yǎng)基和高氏培養(yǎng)基分離的內(nèi)生放線菌最多。其中21株內(nèi)生放線菌對病原真菌表現(xiàn)出抑制抗性。其中5株內(nèi)生菌對8種以上病原菌表現(xiàn)出活性作用。7株內(nèi)生放線菌的平均抑制率在15%左右。有5株內(nèi)生菌發(fā)酵液對病原細(xì)菌表現(xiàn)出抗性作用。在這五種內(nèi)生放線菌中,有三株內(nèi)生放線菌(CY23、CY60、CY64)浸提沉淀物對枯草芽孢桿菌有明顯的抑菌活性,平均抑制率在10%左右。
從64株內(nèi)生放線菌中選出形態(tài)較為少見的四株菌(CY10,CY1
4、2,CY13,CY18),對其進(jìn)行16sRNA測序分析,測序結(jié)果表明CY10屬于小單孢菌屬(Micromonospora),CY13是隸屬于鏈孢囊菌屬(Streptosporangium),CY12和CY18都屬于球孢囊菌屬(Sphaerisporangium)。經(jīng)鑒定NEAU-CY18T為分離自石竹根部的球孢囊菌屬新種,再對其進(jìn)行多相分類學(xué)鑒定。NEAU-CY18T在氣生菌絲上長有球形光滑的孢子囊,孢子不游動。細(xì)胞壁氨基酸成分為內(nèi)消旋
5、-二氨基庚二酸(meso-diaminopimelic acid)。全細(xì)胞水解糖為馬杜拉糖(madurose),半乳糖(galactose),核糖(ribose),葡萄糖(glucose),甘露糖(mannose)。磷酸類脂組成為雙磷脂酰甘油(DPG),磷脂酰甲基乙醇胺(PME),磷脂磷脂酰乙醇胺(PE),羥基磷脂酰乙醇胺(OH-PME),磷脂酰甘油(PG),磷脂酰甘露糖肌醇(PIM)和未知磷酸類脂(PL)。主要甲基萘醌成分為MK-9(
6、H4),MK-9(H2)和MK-9(H6)。主要脂肪酸為C17∶010-methyl,iso-C16∶0 andC16∶0。EzTaxon-e網(wǎng)站分析顯示NEAU-CY18T與S.cinnabarinum JCM3291T(98.9%)和S.melleum JCM13064T相似度最高,分別為98.9%和98.3%。最大似然建樹法以97%的閾值支持這一親緣進(jìn)化關(guān)系,鄰位連接建樹法也支持這種親緣關(guān)系。由于NEAU-CY18T的表型特征與其
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