neotyphodiumgansuense離體麥角堿的檢測和n.lolii麥角堿基因的測序

1、蘭州大學碩士學位論文Neotyphodium gansuense離體麥角堿的檢測和N.lolii麥角堿基因的測序姓名：高嘉卉申請學位級別：碩士專業(yè)：草業(yè)科學指導教師：南志標20060501A B S T R A C TD r u n k e n h o r s eg r a s s ( A c h n a t h e r u m i n e b r i a n s ) i s a l li n t o x i c a t i n gg

2、r a s s t h a tg r o w s i nt h en a t i v e g r a s s l a n d so f N o r t h w e s tC h i n a ．R e c e n t s t u d i e sh a v es h o w nt h el i n k b e t w e e ne n d o p h y t ei n f e c t i o n i n A ．i n e b r i a n

3、 s a n dn a r c o s i so fg r a z i n g a n i m a l s ．T w om a j o re r g o ta l k a l o i d s ，e r g i n e a n d e r g o n o v i n e ，h a v e b e e n d e t e c t e d i n e n d o p h y t ei n f e c t e d b u t n o te n

4、d o p h y t e - f r e e p l a n t so f A ．i n e b r i a n s ．A n e w e n d o p h y t i c f u n g u s ，N e o t y p h o d i u m g a n s u e n s eL i a n dN a n ，h a s b e e ni s o l a t e da n dn a m e d b u t i t s a b i

5、l i t y t o p r o d u c et o x i n s i n v i t r o i su n k n o w n ．H o w e v e Lm o s to f t h e m u l t i p l es t e p sf o r e r g o ta l k a l o i db i o s y n t h e s i si nC l a v i c e p ss p e c i e sh a v eb e

6、e ne l u c i d a t e d ．T w oi m p o r t a n tg e n e si nt h i sp a t h w a ya r ed m a W a n d c p d lh a v eb e e n f o u n da n d c l o n e d ．I nt h i ss t u d y , t h ep r o d u c t i o no f m y c e l i u ma n d e

7、r g o ta l k a l o i d s0 i1 2 i s o l a t e s o fN ．g a n s u e n s e w e r ee x a m i n e d i n f o u rl i q u i d m e d i aa f t e r4t o 8 w e e k sg r o w t h ．1 1 1 e c o n c e n t r a t i o n a n d t e m p o r a l

8、v a r i a t i o n o f e r g i n e a n d e r g o n o v i n e o f Ⅳg a n s u e n s ew e r e a s s e s s e du s i n gH P L C ．T o i n v e s t i g a t ew h y s o m es t r a i n sC a n p r o d u c e e r g o ta l k a l o i d s

9、 b u to t h e r sc a n n o t ．Is e q u e n c e d t h ed m a W g e n e f r o mt h ee r g o v a l i n ep a t h w a yo f N ．1 0 l i i i s o l a t e L p l 9 w h i c hp r o d u c e s e r g o v a l i n e a n d o fA R lw h i c

10、h d o e s n o t p r o d u c ee r g o v a l i n ea n d c o m p a r e dt h e m w i t h a d a t a b a s es e q u e n c e s i nG e n B a n k ．^ 】= g a n s u e n s eg r e ws i g n i f i c a n t l yb e R e r i nM 1 0 2a n dP D

11、 B l i q u i dm e d i a t h a ni nS M o rM 1 0 4 ．O p t i m a lg r o w t h i n l i q u i d m e d i a w a si n M 1 0 2 ．H o w e v e r , p r o d u c t i o no fe r g o ta l k a l o i d sw a s s i g n i f i c a n t l yg r e

12、a t e ri nS M a n d M 1 0 4 t h a ni nt h e o t h e r t w o l i q u i dm e d i a ，a n dw a s o p t i m a l i nM 1 0 4 ．M y c e l i a lp r o d u c t i o no f 1 2i s o l a t e sw a s s i g n i f i c a n t l yd i f f e r e

13、n ti nM 1 0 2a n dP D B a f t e rf o u rw e e k s g r o w t h ．I nM 1 0 2 ，p r o d u c t i o nb yi s o l a t e sN g S l a la n d N g L l l 2 w a s t h eh i g h e s ta m o n g t h e i s o l a t e s t e s t e d ( 6 8 ．2 5a

14、 n d 6 5 ．5 6m g ／m l ，r e s p e c t i v e l y ) ，i s o l a t e so f N g L l 4 1 a n dN g L 2 2 1 ( 1 2 ．3 0 5 a n d1 6 ．0 4m g ／m l ，r e s p e c t i v e l y ) ，w h i c hw e r et h el o w e s tp r o d u c e r sa to n l y

15、1 8 ．0 3 ％一2 7 ．5 7 ％a n d1 8 ．7 7 ％- 2 4 ．4 7 ％o f t h a t o f N g S l a la n d N g L l l 2 ．T h ec o n c e n t r a t i o no fe r g o t a l k a l o i d si n c r e a s e dw i t ht i m e i nS M a n dM 1 0 4 l i q u i dm e

16、 d i a ．T h ea b i l i t yt o p r o d u c e e r g o ta l k a l o i d sv a r i e di nt h e12 i s o l a t e s ．A f t e re i g h tw e e k sg r o w t hi nM 1 0 4 m e d i u m ，N g L l 5 Ip r o d u c e dt h eh i g h e s t c o

17、n c e n t r a t i o no f e r g i n e ( 2 7 ．6p p m ) ，a n d t h i sw a s f i v et i m e sm o r et h a n t h a to f N g L l 4 1 ( 5 ．4 6 p p m ) w h i c h w a s t h el o w e s t p r o d u c e r ．N g L 2 2 1p r o d u c e d

18、 t h e h i g h e s tc o n c e n t r a t i o n o f e r g o n o v i n e ( 3 2 ．5 5p p m ) ，w h i c h W a s1 0 t i m e s t h a t o f t h e l o w e s t p r o d u c e r N g L l 4 1 ( 3 ．2 5 p p m ) ．I n M l 0 4 ．t h e m e a n

19、c o n c e n t r a t i o n s ( o f t h e t w e l v e i s o l a t e s ) o f e r g i n ea n d e r g o n o v i n e w e r e1 5 ．8a n d1 2 ．8p p mr e s p e c t i v e l y , 1 ．2 t i m e sm o r et h a n t h o s e i nS M ( 1 0 ．6

20、 m i d 3 ．2p p m r e s p e c t i v e l y ) ．E r g i n e a n d e r g o n o v i n eh a v eb e e nd e t e c t e di nS M a n dM 1 0 4l i q u i dc u l t u r e so fll o ft h e1 2i s o l a t e so f N ．g a n s u e n s e b u tn o

21、 ti nt h ei s o l a t eo f Ⅳ= l o l i io ro f i s o l a t eN g L l 6 1o f N ．g a n s u e n s e ．U s i n g t h i s i s o l a t e ，i t m a yb e p o s s i b l e t o p r o d u c ee n d o p h y t e i n f e c t e d Ai n e b r