2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、western轉(zhuǎn)膜條件轉(zhuǎn)膜條件蛋白來源:RAW264.7總蛋白蛋白名稱(可保密):一些轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量:40~70KDWB用膜類型、孔徑:0.45NC轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):濕轉(zhuǎn)恒流400mA轉(zhuǎn)膜時間:60~90minPS.其實吧,以我的經(jīng)驗來看,除非目的蛋白特別小,或者特別大,不然轉(zhuǎn)膜時間真的不是那么重要,曾經(jīng)因為失誤,轉(zhuǎn)了15min就拆下來了,但從麗春紅染色來看,跟平常實驗也沒有太大的區(qū)別。蛋白來源:內(nèi)皮細(xì)胞總蛋白蛋白名稱(可保密

2、):occludin&AKT蛋白分子量:65KD&56KDWB用膜類型、孔徑:0.45PVDF轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):濕轉(zhuǎn)恒壓100V轉(zhuǎn)膜時間:60~70min設(shè)備名字是“BioRadmini”。蛋白來源:乳鼠心肌細(xì)胞和成年鼠心肌組織總蛋白和核蛋白蛋白名稱(可保密):保密蛋白分子量:65KD&55KDWB用膜類型、孔徑:PVDF(預(yù)先用甲醇處理)轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):半干轉(zhuǎn)恒壓12V轉(zhuǎn)膜時間:3040min設(shè)備:“BioRadmini

3、”建議:最開始做過濕轉(zhuǎn)(過夜的那種),太費事費時,效果也不如半干轉(zhuǎn)。蛋白來源:293T細(xì)胞蛋白名稱(可保密):蛋白分子量:95KD&35KDWB用膜類型、孔徑:PVDF轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):濕轉(zhuǎn)恒壓90V110V,控制電流不要超過300mA。轉(zhuǎn)膜時間:70min蛋白來源:腫瘤手術(shù)標(biāo)本蛋白名稱(可保密):轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量:33KDaWB用膜類型、孔徑:PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):350mA恒流轉(zhuǎn)膜時間:150min蛋白名稱(可保

4、密):保密蛋白分子量:大于250kDWB用膜類型、孔徑:millipePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):濕轉(zhuǎn),恒流0.3A。轉(zhuǎn)膜時間:180min設(shè)備:“BioRad”建議:電轉(zhuǎn)保持電壓在70V以上,保持低溫,如果電壓低過70就需要換緩沖液了。蛋白來源:白血病細(xì)胞蛋白名稱(可保密):保密蛋白分子量:28KDWB用膜類型、孔徑:0.45的NC膜轉(zhuǎn)膜方式(恒流):濕轉(zhuǎn),90min,0.25A設(shè)備:“BioRad”建議:海綿厚度要

5、合適,一次轉(zhuǎn)磨用的海綿太薄,導(dǎo)致三明治沒夾緊,轉(zhuǎn)膜后拿出來一看,marker都變得七扭八歪。但是有前輩說墊的海綿太厚可能將膠壓斷,沒經(jīng)歷過,不知道是不是會有這種情況。蛋白來源:腫瘤細(xì)胞蛋白名稱(可保密):磷酸化蛋白蛋白分子量:10200KDaWB用膜類型、孔徑:millipePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式(恒壓、恒流):120v恒壓轉(zhuǎn)膜時間:120min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn)BioRad建議:轉(zhuǎn)膜緩沖液只用2次,基本都轉(zhuǎn)上,5%BSA封閉,減少

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