酵母菌的分離與純化

1、酵母菌的分離與純化土壤是微生物生活的大本營，是尋早有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同圖樣中各類微生物的含量不同，一般土壤中細菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。放線菌一般在較干燥、偏堿性、有機質較多的土壤中較多；霉菌在含有機質豐富、偏酸性、通氣性較好的土壤中較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果園土壤中數(shù)量多些。（一）菌源1土樣用無菌的采樣小鏟在橘樹果園中取土壤表層下1~10cm土壤10g，裝入滅菌的牛皮紙袋內(nèi)

2、。封好袋口，記錄取樣地點、環(huán)境及日期。圖樣采集后應及時分離，飯不能立即分離的樣品，應保存在低溫、干燥的條件下，以減少其中菌相的變化。2面肥（1）面粉500克，白酒100克，水250，和好靜置發(fā)酵就可以了。冬季10個小時。（2）在溫水中兌一點酒，倒入適量面粉拌勻后放入絕緣保溫盛器（陶瓷，砂鍋）中，用布將整個盛器蓋好置于溫度較高處，6小時后即成面肥。以上方法做出的面肥只能保存幾天，不宜放置太久。3水果果皮桔子和葡萄等的果皮上含有數(shù)量較多的酵

3、母菌，既可單獨作為菌源也可以和果園土壤作為混合菌源。（二）酵母菌的分離1制備菌懸液稱取菌源1g，加入盛有99ml無菌水或無菌生理鹽水并裝有玻璃珠的錐形瓶中。振蕩20min，即成102的菌源懸液。再一次稀釋成104、105、106三個稀釋度。2涂布法分離取融化并冷卻至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基，每皿分別傾注約12ml培養(yǎng)基到培養(yǎng)皿內(nèi)。注意，溫度過高易將菌燙死，皿蓋上冷凝水太多也會影響分離效果；低于45度培養(yǎng)基易凝固，平板高低不平

4、。呆平板冷卻后，用無菌移液管分別吸取上述已經(jīng)制好的菌源稀釋液104、105、106三個稀釋度菌懸液各0.1ml，依次滴加于相應編號的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基平板上。每個稀釋度做2~3個平行皿。左手拿培養(yǎng)皿，并用拇指將皿蓋打開一縫，再火焰旁右手持無菌玻璃涂棒將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴散。注意，切忌用力過猛，這樣會將菌液直接推向平板邊緣或將培養(yǎng)基劃破。3培養(yǎng)接種后，平版倒置于30度恒溫箱中，培養(yǎng)2~3天，觀察結果。4純化用接種環(huán)挑取單個單個

5、酵母菌菌落，在平板上四區(qū)劃線，培養(yǎng)后分離得到單個菌落。酵母擴培方案酵母擴培方案一、培養(yǎng)基制備一、培養(yǎng)基制備(一)麥芽汁培養(yǎng)基的配制麥芽汁培養(yǎng)基的配制1培養(yǎng)基成分新鮮麥芽汁一般為1015波林。2配制方法(1)用水將大麥或小麥洗凈，用水浸泡612h，置于15℃陰涼處發(fā)芽，上蓋紗布，每日早、中、晚淋水一次，待麥芽伸長至麥粒的兩倍時，讓其停止發(fā)芽，曬干或烘干，研磨成麥芽粉，貯存?zhèn)溆?。K2HP040.1gKCl0.05gMgSO47H2O0.05

6、gFeS040.001g瓊脂1.52g蒸餾水100ml自然pH2配制方法(1)稱量及溶化量取所需水量約2／3左右加入到燒杯中，分別稱取蔗糖、NaNO3、K2HP04、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100ml培養(yǎng)基加入1ml0.1％的FeS04溶液。（2）定容候藥品全部溶解后，將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。（3）加瓊脂加入所需量瓊脂，加熱融化，補足失水。(4)分裝、加塞、包扎。(5)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min

7、。YPDYPD培養(yǎng)基培養(yǎng)基YPD或YPED，：YeastExtractPeptoneDextroseMedium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基，加入瓊脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌的培養(yǎng)配方：1%YeastExtract（酵母膏），2%Peptone（蛋白胨），2%Dextrose(glucose)（葡萄糖），若制固體培養(yǎng)基，加入2%瓊脂粉配制方法：1溶解10gYeastExtract（酵母膏）20gPep

8、tone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g瓊脂粉2高壓121度20min3加入100ml10Dextrose(glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液滅菌后加入)注：葡萄糖，yeastextractpeptone溶液混合后在高溫下可能會發(fā)生化學反應，導致培養(yǎng)基成分變化，所以要分別滅菌后再混合。YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作為碳源外，其他成分同YPD二、接種操作二、接種操作【器具】：酒精燈、酒精棉、剪刀、接種針