降解柴油酵母菌的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、石油工業(yè)迅速發(fā)展的同時(shí)帶給人類日益嚴(yán)重的環(huán)境污染問題。水體和大氣受到污染，土壤質(zhì)量下降破壞農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，污染物進(jìn)入食物鏈造成人體損傷。因此，原油污染土壤的修復(fù)處理對(duì)消除環(huán)境污染保障人體健康以及社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。用微生物處理油污土壤是一種可行的方法，因其費(fèi)用低、操作簡單、無二次污染，應(yīng)用前景廣闊。酵母菌作為真菌類微生物，其分解酶與細(xì)菌相比有一定特異性，在承受污染負(fù)荷、需氧量和耐滲透壓方面具有極大優(yōu)勢，另外，酵母菌可以發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞

2、蛋白，因此酵母菌是進(jìn)行油污土壤修復(fù)的優(yōu)勢微生物。
　　本研究致力于篩選一種能夠利用石油烴的酵母菌，對(duì)其降解性能進(jìn)行研究，并對(duì)其在油污土壤中的生物修復(fù)作用進(jìn)行初步探索。從勝利油田長期被石油污染的土壤中經(jīng)富集分離純化獲得一株能夠降解柴油的酵母菌，采用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法提取酵母菌的基因組DNA，并選用通用引物對(duì)菌株的18S rDNA基因序列進(jìn)行擴(kuò)增、測序和比對(duì)分析，并結(jié)合傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察和生理生化特性研究將分離到的酵母菌種鑒定為假絲酵母

3、屬的奧默畢赤酵母單倍體種。以柴油作為唯一碳源，對(duì)分離到酵母菌的降解特性進(jìn)行研究，通過單因素實(shí)驗(yàn)、無重復(fù)雙因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)對(duì)該酵母菌種降解柴油的條件進(jìn)行優(yōu)化，并確定最佳的液體降解條件為：最適氮源為(NH4)2SO4，最適磷源為KH2PO4+Na2HPO4，最佳c：N：P為50：5：1，最適pH為6，最適溫度30℃，通氣量(錐形瓶容積)500mL，接種量(OD600=2．0)為3％。其中溫度對(duì)菌株降解柴油的影響最大，耐適較寬范圍的pH值和

4、較高的鹽度。通過條件優(yōu)化后，酵母菌對(duì)柴油的降解率達(dá)到46．8％。采用色譜法對(duì)酵母菌降解前后柴油的組成進(jìn)行了分析，經(jīng)GC分析結(jié)果可知本研究獲得的酵母菌對(duì)柴油有很好的降解作用，尤其對(duì)柴油中的直鏈烷烴有很好的降解效果，而對(duì)含有支鏈、雙鍵及苯環(huán)的復(fù)雜烷烴降解能力有限。
　　在油污土壤生物修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，采用本土微生物生物強(qiáng)化法進(jìn)行室內(nèi)堆腐模擬實(shí)驗(yàn)，即將分離到的酵母菌應(yīng)用于原獲得地的油污土壤的生物修復(fù)。采取勝利油田長期被石油污染土壤并在花盆中進(jìn)