知識點3 微生物的分類鑒定方法

1、一、微生物分類鑒定中的經典方法二、微生物分類鑒定中的現代方法1.微生物遺傳型的鑒定 DNA堿基比例的測定 核酸分子雜交法 16SrRNA寡核苷酸編目分析2.細胞化學成分的鑒定三、數值分類法,第三節(jié) 微生物分類鑒定的方法,菌種鑒定工作的步驟：,1.獲得該微生物的純培養(yǎng)物2.測定一系列必要的鑒定指標3.查找權威性的菌種鑒定手冊,一、經典分類鑒定方法,(一) 形態(tài)特征：包括個體形態(tài)和群體形態(tài)(即培養(yǎng)特征)

2、 1.在顯微鏡下觀察細胞的形狀、大小及排列情況，革蘭氏染色反應，有無運動，鞭毛著生位置和數目，芽孢的有無及芽孢著生的部位和形狀，細胞內含物，個體發(fā)育過程中形態(tài)變化的規(guī)律性。 2.在固體培養(yǎng)基上觀察菌落的形狀、大小、顏色、光澤、粘稠度、隆起形狀、透明度及邊比重特征，和水溶性色素、質地、移動性、氣味等。 3.在半固體培養(yǎng)基中觀察穿刺接種后的生長及運動情況。 4.在液

3、體培養(yǎng)基中觀察生長特征，液體是否混濁及混濁的程度；液面有無菌膜；管底有無沉淀以及沉淀的形狀；管中有無氣泡；培養(yǎng)液中有無顏色變化等。,,(二) 生理生化特性 1.營養(yǎng)要求：可根據微生物對營養(yǎng)的不同利用能力來區(qū)別微生物。試驗多種營養(yǎng)能否被微生物作為碳源和能源利用，以及微生物對一定有機化合物或CO2的利用能力。對于氮源來講，看其是取自蛋白質、蛋白胨、氨基酸或銨鹽、硝酸鹽，還是大氣中的游離氮。 2.代

4、謝產物：不同的微生物，因生理特性的不同而產生不同的代謝產物。因此，檢查微生物的代謝產物，可以用來鑒別不同的微生物。在培養(yǎng)基中檢查微生物是否形成有機酸、酒精、氣體與類似的物質；能否與解色氨酸產生吲哚；是否產生色素或其他物質，如抗生素等。 3.酶：產酶的種類何反應特性等。 4.對藥物的敏感性,,（三）血清學反應 有時確定微生物的種，尤其是亞種，僅依據形態(tài)、生理生化等特征很難區(qū)別

5、開。因此，常借助于血清學反應。 在微生物分類鑒定中，應用血清學反應的基本原理，是用已知菌種、型或菌株制成抗血清，然后根據它們與待鑒定微生物是否發(fā)生特異性的血清學反應，來確定未知菌種、型或菌株。 血清學反應的方法同樣可應用于病毒的分類，尤其是應用于噬菌體的分類，具有良好的效果。一般噬菌體都是良好的抗原，把它注射到動物體內可以產生特異性抗體。噬菌體和抗體間的反應和其他常見的抗原抗體反應相似。,二、

6、現代分類鑒定方法,（一）微生物遺傳型的鑒定 1. DNA堿基比例的測定：（G+C）mol%，DNA分子中G和C所占的摩爾百分比。 2. 核酸分子雜交法：按照堿基的互補配對原理，用人工方法對兩條不同來源的單鏈核酸進行復性，以構建新的雜合雙鏈核酸技術。 3. 16SrRNA寡核苷酸編目分析 4. 微生物全基因組序列測定,（二）細胞化學成分的鑒定1.細胞壁的化學成分：主要是肽聚糖的基本結構2.全細胞水解液的糖型3

7、.磷酸類脂成分的分析4.枝菌酸的分析5.醌類的分析6.氣相色譜技術的應用,三、數值分類法,數值分類法：依據數值分析的原理，借助現代電子計算機技術對擬分類的微生物對象按大量表型性狀的相似程度進行統(tǒng)計、歸類的方法。步驟： ①確定分類單元和選擇分類特征； ②進行特征測定或從文獻中收集有關OUT（操作分類單位）的各項特征資料； ③根據所編制的計算機程序要求，將特征資料進行編碼、標準化并輸入計算機； ④由計