biolog微生物鑒定步驟

1、Biolog微生物鑒定步驟微生物鑒定步驟一檢測原理檢測原理Biolog微生物鑒定系統(tǒng)測試的是微生物在鑒定板中利用或氧化化和物的能力。測試會產(chǎn)生特征性的紫色孔模式，組成代謝指紋。所有必需的營養(yǎng)物質(zhì)和生化試劑都預先加進96孔板中，四唑紫是一種氧化還原染料，指示碳源的利用情況。.鑒定步驟非常簡單，純化分離到的菌株經(jīng)擴大培養(yǎng)，再制成接種液加到鑒定板中。在培養(yǎng)過程中，一些孔中的化學物質(zhì)能被氧化并將顯色物質(zhì)成紫色，對照孔（A1）和陰性孔仍然為無色。

2、鑒定板在相應的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)46小時或1624小時即可形成代謝模式。系統(tǒng)軟件自動和數(shù)據(jù)庫對比，如果能找到合適的匹配，就可以得出一個鑒定結果。二所需器材和消耗品：所需器材和消耗品：?培養(yǎng)基、接種液、巰基乙酸鈉、長棉簽、接種棒、儲液槽、八道移液器、移液器頭、濁度儀、濁度標準品、控溫培養(yǎng)箱和相應的鑒定板。其中接種液自行配制，接種棒、儲液槽可選用國產(chǎn)品牌代替。三鑒定步驟：鑒定步驟：Biolog微生物鑒定樣品處理步驟微生物鑒定樣品處理步驟分離純化

3、培養(yǎng)基BUGB通用培養(yǎng)基加羊血BUAB厭氧培養(yǎng)基加羊血BUY酵母培養(yǎng)基2%ME2%的麥芽汁提取物革蘭氏染色和菌落菌株形態(tài)觀察革蘭氏染色結果革蘭氏陰性厭氧菌確認實驗氧化酶反應陽性確認實驗氧化酶反應陰性、三糖鐵實驗KK或KAw氧化酶反應陰性、三糖鐵實驗AA或KA需在巧克力培養(yǎng)基上或需要6.5%CO2培養(yǎng)革蘭氏陽性酵母菌絲狀真菌道里分離出來的，如ActinobacillusAlysiellaBrucellaCapnocytophagaCDCG

4、roupDF3CDCGroupEF4EikenellaHaemophilusKingellaMaxellaNeisseriaSimonsiellaSuttonella和Taylella。如果是革蘭氏陽性菌，用革蘭氏染色可以很容易的區(qū)分球菌和桿菌，推薦再做一個過氧化氫酶實驗，最終確定是球菌還是桿菌。通過革蘭氏染色或觀察菌落形態(tài)可以區(qū)分出芽孢桿菌。微生物的擴大培養(yǎng)應該用Biolog推薦的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，以便使微生物達到最佳的代謝活性，進而

5、準確的和數(shù)據(jù)庫中的代謝模式匹配。微生物應該是新鮮的，確保其處于指數(shù)增長期，因為一些菌株在達到穩(wěn)定期時會失去生存能力或代謝活性，推薦的培養(yǎng)周期為424個小時。如果擴大培養(yǎng)的量不足以配制相應的濁度，可以培養(yǎng)多個平板，培養(yǎng)時間可以延長到48個小時。第二步：第二步：首先確定濁度儀沒開啟電源的時候，指針應指在0%，如果沒有，用螺絲刀調(diào)整。開啟電源，取未開蓋的裝有接種液的試管，擦干凈管壁，放入濁度儀，指針應指在100%，如果沒有，旋動右方旋鈕?。然

6、后用濁度標準管檢驗，讀數(shù)在2%都是正常的。要使用哪管接種液，就用相應的試管做100%校正，不要在濁度儀的光路中旋轉試管。?在鑒定革蘭氏陰性腸道菌和苛生菌的時候，在接種液里應該加準確三滴巰基乙酸鈉。巰基乙酸鈉的作用是抑制芽孢形成，并且可以部分或完全的抑制A1或其它孔由于微生物利用自身分泌的聚多糖莢膜而出現(xiàn)的紫色。一些非腸道菌液需要添加巰基乙酸鈉。按照下列步驟制備均勻的菌懸液：用接種液將棉簽稍微浸濕，用棉簽在菌落上面輕輕的滾動可以將菌落取到

7、接種液中，從而不會將培養(yǎng)基或其它營養(yǎng)物質(zhì)帶入接種液。先取單菌落，不夠再取生長緊密的菌落。在試管內(nèi)壁接種液液面的上方，旋轉擠壓棉簽可以將菌落團分散。然后上下移動棉簽，將分散的菌落和接種液充分混合形成均一，無菌團的菌懸液。如果菌懸液有菌團，可以讓菌團沉到管底。??調(diào)整濁度直至達到允許的范圍，增加接種液或添加菌落可以降低或升高菌懸液的密度。??將菌懸液接種到鑒定板上，不要超過20分鐘。如果長時間部接種到鑒定板上，一些菌會失去代謝活性。第三步：