微生物鑒定中常用的生理生化試驗(yàn)

1、1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?.證明不同微生物對各種有極大分子物質(zhì)的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。2.掌握微生物大分子物質(zhì)水解實(shí)驗(yàn)的原理和方法。3.了解糖發(fā)酵的原理和在腸細(xì)菌鑒定中重要作用。4.掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。5.了解IMViC的原理。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理由于各種微生物具有不同的酶系統(tǒng)，所以他們能利用的底物不同，或雖利用相同的底物但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物卻不同，因此可以利用各種生理生化反應(yīng)來鑒別不同的細(xì)

2、菌，尤其是在腸桿菌科細(xì)菌的鑒定中，生理生化試驗(yàn)占有重要的地位。具體的原理如下：1.淀粉水解試驗(yàn)：在淀粉固體培養(yǎng)基上接種兩種細(xì)菌（枯草桿菌，大腸桿菌），培養(yǎng)兩天以后，再往培養(yǎng)基中加碘液染色，若該細(xì)菌能分泌胞外淀粉酶，則能利用其周圍的淀粉，淡然在染色后，其菌落周圍不呈藍(lán)色，而是無色透明圈。2.糖發(fā)酵試驗(yàn)：不同的細(xì)菌分解糖的能力不同，有些細(xì)菌能利用糖發(fā)酵產(chǎn)酸和產(chǎn)氣，有些則不能。酸在加入溴甲酚指示劑后會使溶液呈黃色，且德漢氏小管中會收集到一部分

3、氣體。若細(xì)菌不能使糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則最后溶液為指示劑的紫色，且德漢氏小管中無氣體。3.IMVC實(shí)驗(yàn)主要用于快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。（1）吲哚試驗(yàn)：在蛋白胨培養(yǎng)基中，若細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，則可將蛋白胨中的色氨酸分解為丙酮酸和吲哚，吲哚與對二甲基苯甲醛反應(yīng)生成玫瑰色的玫瑰吲哚。本次不做該試驗(yàn)。（2）甲基紅試驗(yàn)（MR）：某些細(xì)菌在糖代謝過程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者進(jìn)而被分解產(chǎn)生甲酸，乙酸和乳酸等多種有機(jī)酸，是培養(yǎng)液PH值降至4.2以下，

4、加入甲基紅后溶液呈紅色。三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1.菌種大腸桿菌（Escherichiacoli），金黃色葡萄球(StaphyloccocusaureusRosenbach)，銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢桿菌（BacillussubtilisCohn），產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)，普通變形桿菌（Proteus.vulgaris)。2.培養(yǎng)基固體油脂培養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基，葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)

5、基（5支，附德漢式小管），乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基（5支，附德漢式小管），蛋白胨水培養(yǎng)基。3.溶液和試劑革蘭氏染色用盧戈氏碘液，甲基紅指示劑，乙醚和吲哚試劑，無菌水。4.儀器和其他用品平板，試管，接種環(huán)，試管架，電子天平，稱量紙，玻璃棒，三角瓶，燒杯，藥匙，標(biāo)簽紙，酒精燈，滴管。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.淀粉水解實(shí)驗(yàn)（1）培養(yǎng)基制備3將上述已接種的試管置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。6.甲基紅實(shí)驗(yàn)（1）培養(yǎng)基制備將配制好的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基分

6、裝于試管中后放入滅菌鍋中進(jìn)行濕熱滅菌。（2）接種用記號筆在各試管上標(biāo)明所接種的菌名。取盛有葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基的試管2支，按編號1支接種大腸桿菌，另1支接種產(chǎn)氣腸桿菌。（3）培養(yǎng)將上述已接種的試管置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)（1）淀粉水解實(shí)驗(yàn)“”表示陽性，可以水解淀粉，“—”表示陰性，不可以水解淀粉菌種陰陽性結(jié)論大腸桿菌—不可以水解淀粉枯草芽孢桿菌可以水解淀粉金黃色葡萄球菌—不可以水解淀粉