細(xì)菌生理生化試驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的細(xì)菌的單孢分離單孢分離微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細(xì)胞結(jié)構(gòu)（包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進(jìn)行觀察，直觀地了解細(xì)菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達(dá)到區(qū)別、鑒定微生物的目的。細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細(xì)胞群體叫菌落（colony）。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特征有很大差異，而同一種的細(xì)菌在一定條

2、件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗(yàn)鑒別中的一項重要內(nèi)容。一：細(xì)菌的培養(yǎng)特征包括：在固體培養(yǎng)基上觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運(yùn)動、擴(kuò)散情況。1、瓊脂平皿上的生長表現(xiàn)觀察并記錄不同的菌落：大小、形狀、邊緣、表面性狀、隆

3、起度、顏色、透明度、硬度、溶血等。2、觀察瓊脂斜面上的生長表現(xiàn)：菌苔的顏色及茂盛情況。3、觀察半固體瓊脂的生長現(xiàn)象：絨毛狀、線狀等。二：細(xì)菌的培養(yǎng)特征1.點(diǎn)狀2.圓形3.絲狀4.不規(guī)則形5.假根狀6.紡錘狀7.扁平8.隆起9.凸起10.墊狀11.臍狀12.邊緣整齊13.波狀14.裂片狀15.嚙蝕狀16.絲狀17.卷發(fā)狀18.絲線狀19.刺毛狀20.串珠狀21.疏展?fàn)?2.樹根狀23.假根狀24.絲狀25.串珠狀26.乳頭狀27.絨毛狀2

4、8.樹根狀29.量杯狀30.蘿卜狀31.漏斗狀32.囊狀33.層狀34.絮狀35.環(huán)狀36.蹼狀37.膜狀實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)九細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)1目的1.1了解細(xì)菌鑒定中常用的生理生化試驗(yàn)反應(yīng)原理1.2掌握測定細(xì)菌生理生化反應(yīng)的技術(shù)和方法2原理各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了很大的差異。由于細(xì)菌特有的單細(xì)胞原核生物的特性，這種差異就表現(xiàn)的更加明顯。不同細(xì)菌分解、利用糖類、脂肪類和蛋白類物質(zhì)的能力不同，所以其發(fā)

5、酵的類型和產(chǎn)物也不相同，也就是說，不同微生物具有不同的酶系統(tǒng)。即使在分子生物學(xué)技術(shù)和手段不斷發(fā)展的今天，細(xì)菌的生理生化反應(yīng)在菌株的分類鑒定中仍有很大作用。3材料3.1菌種大腸埃希氏菌（Escherichiacoli）、產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacteraerogenes）、普通變形桿菌（Proteusvulgaris）、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）的斜面菌種3.2培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、糖發(fā)酵培

6、養(yǎng)基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3試劑：40％NaOH溶液、肌酸、甲基紅試劑、吲哚試劑、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示劑。3.4器具：超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、試管、移液管、杜氏小套管。4流程：糖發(fā)酵試驗(yàn)→VP試驗(yàn)→甲基紅試驗(yàn)→吲哚試驗(yàn)5步驟取5支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對照。5.2接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中，空白對照管不接菌，置37℃恒溫箱

7、中，培養(yǎng)24～48h。5.3觀察記錄取出以上試管，振蕩2min。另取5支空試管相應(yīng)標(biāo)記菌名，分別加入3～5ml以上對應(yīng)管中的培養(yǎng)液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙簽挑入約0.5～1mg微量肌酸，振蕩試管，以使空氣中的氧溶入，置37℃恒溫箱中保溫15～30min后，若培養(yǎng)液呈紅色，記錄為V.P.試驗(yàn)陽性反應(yīng)（用“＋”表示）；若不呈紅色，記錄為V.P.試驗(yàn)陰性反應(yīng)（用“－”表示）。注意：原試管中留下的培養(yǎng)液用作甲基紅試驗(yàn)。（三

8、）甲基紅試驗(yàn)（M.R.試驗(yàn)）1目的了解鑒別腸桿菌科各菌屬的甲基紅試驗(yàn)原理，并掌握其操作方法2原理腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。3材料3.1菌種同VP試驗(yàn)3.2培養(yǎng)基同VP試驗(yàn)4流程培養(yǎng)液→指示劑→觀察→記錄結(jié)果5步驟于V.P.試驗(yàn)留下的培養(yǎng)液中，各加入2～3滴甲基紅指示

9、劑，注意沿管壁加入，仔細(xì)觀察培養(yǎng)液上層，若培養(yǎng)液上層變成紅色，即為陽性反應(yīng)；若仍呈黃色，則為陰性反應(yīng)，分別用“＋”或“－”表示。（四）吲哚試驗(yàn)1目的掌握吲哚試驗(yàn)(Ehrlich法)的原理和方法2原理有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基質(zhì))。吲哚本身沒有顏色，不能直接看見，但當(dāng)加入對二甲基氨基苯甲醛試劑時，該試劑與吲哚作用，形成紅色的玫瑰吲哚。3材料3.1菌種測試菌株3.2培養(yǎng)基蛋白胨水培養(yǎng)基3.3試劑二甲基氨基苯甲