水稻淀粉極限糊精酶基因RNAi載體構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、　　淀粉是許多谷類作物籽粒的重要貯藏物質(zhì)，是人類主要的熱量來源，它作為工業(yè)原料廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等工業(yè)中。淀粉的功能和用途由其結(jié)構(gòu)和特性所決定，葡萄糖焦磷酸化酶、淀粉合成酶、淀粉分支酶和淀粉脫支酶是參與淀粉生物合成的關(guān)鍵酶?；蚬こ碳夹g(shù)的發(fā)展使通過調(diào)控淀粉合成關(guān)鍵酶活性，進(jìn)而定向改變淀粉組成和結(jié)構(gòu)成為可能，轉(zhuǎn)錄后基因沉默技術(shù)(PTGS)或RNA干擾技術(shù)(RNAi)為實現(xiàn)這一目標(biāo)提供了新的途徑?！　⊥ㄟ^構(gòu)建RNAi載體抑制水稻淀粉脫支

2、酶基因的表達(dá)研究，獲得如下結(jié)果：　　1.經(jīng)酶切、序列測定及Southern雜交證實，成功構(gòu)建出水稻極限糊精酶RNAi載體——胚乳特異表達(dá)啟動子啟動、含intron的水稻極限糊精酶基因iHP載體?！　?.獲得抗性再生株系29個，經(jīng)RCR及Southern雜交檢測，28個水稻轉(zhuǎn)基因再生株系含有所構(gòu)建的iHP結(jié)構(gòu)?！　?.以極限糊精酶為抗體對轉(zhuǎn)基因株系胚乳發(fā)育期籽粒蛋白質(zhì)進(jìn)行Western雜交結(jié)果顯示，該iHP結(jié)構(gòu)在胚乳發(fā)育期表達(dá)，減少