木薯淀粉分支酶基因sbei的克隆、表達(dá)分析及RNAi載體構(gòu)建.pdf

1、本研究以親緣性相近的高淀粉木薯品種輻選01(FX01)和低淀粉木薯品種華南124(SC124)為試驗材料，運(yùn)用RT-PCR擴(kuò)增克隆技術(shù)分別克隆FX01和SC124的淀粉分支酶基因sbei，并分析兩個木薯品種sbei基因序列的差異。運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)對兩個木薯品種的sbei在不同組織不同生育期里的表達(dá)量進(jìn)行分析，并測定分析兩個木薯品種塊根的淀粉分支酶活性、總淀粉含量以及支鏈、直鏈淀粉含量在不同生育期的變化情況，以探究木薯塊根淀粉分支酶

2、活性與塊根淀粉合成的關(guān)系。研究結(jié)果表明:
　　1、本研究分別克隆了FX01與SC124的sbei基因，經(jīng)過比對分析后得出兩個木薯品種的sbei基因序列與其編碼的氨基酸無差異，其包含完整的開放閱讀框2559bp，編碼852個氨基酸。
　　2、熒光定量PCR結(jié)果表明，在整個生育期里FX01的sbei表達(dá)量高于SC124;在不同的組織里，木薯塊根的sbei表達(dá)量要高于葉片和莖段;在塊根膨大期時，木薯的葉片、莖段以及塊根的sbei表

3、達(dá)量均達(dá)到最高。
　　3、根據(jù)已克隆出的木薯sbei基因序列信息以及網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫，選取了一段426bp的RNA干擾片段，成功構(gòu)建了sbei基因的RNA干擾載體PART27-RNAi，其具有類似hpRNA的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。
　　4、在整個生育期中，高淀粉木薯品種FX01塊根的SBE酶活性高于低淀粉木薯品種SC124;在塊根形成后期，兩個木薯品種塊根的SBE酶活性均達(dá)到最高，此時兩個木薯品種的總淀粉增加速率最快。
　　5、FX01