馬鈴薯淀粉合成酶Ⅲ基因cDNA的克隆及RNA干擾載體的構(gòu)建.pdf

1、淀粉是植物通過(guò)光合作用產(chǎn)生的一種多糖高分子化合物。馬鈴薯塊莖中淀粉含量一般占其鮮重的9%～25%，是僅次于玉米淀粉的生產(chǎn)量和商品量而居第二位的植物淀粉。目前，生產(chǎn)上推廣的馬鈴薯品種，其淀粉糊化溫度、粘度、凍融穩(wěn)定性都不太理想。本研究將通過(guò)RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增馬鈴薯可溶性淀粉合成酶Ⅲ（SSⅢ）基因的cDNA序列，然后通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制該基因的表達(dá)，以改變淀粉的結(jié)構(gòu)，提高淀粉中共價(jià)磷酸的含量，培育出更適合于加工業(yè)的馬鈴薯新品系（種）；同

2、時(shí)，應(yīng)用RNA干擾這種反向遺傳學(xué)手段，研究SSⅢ基因的功能，及SSⅢ在淀粉合成中的作用和淀粉合成的機(jī)理。取得的主要研究結(jié)果有： 1．通過(guò)RT-PCR技術(shù)克隆了SSⅢ基因的cDNA，序列分析表明該cDNA片段全長(zhǎng)為3967 bp，開(kāi)放閱讀框3693 bp，編碼1230個(gè)氨基酸。核酸序列同源性分析表明，該基因與GenBank中已登記的SSⅢ基因（X94400）的同源性高達(dá)99%；氨基酸序列與SSⅢ基因（X94400）編碼蛋白（CAA

3、64173．1）的同源性高達(dá)98%。 2．SSⅢ蛋白的生物信息學(xué)分析表明，該蛋白質(zhì)具有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，沒(méi)有跨膜區(qū)；蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，有369個(gè)氨基酸可能形成α-螺旋結(jié)構(gòu)，249個(gè)氨基酸可形成β折疊，102個(gè)氨基酸可形成β轉(zhuǎn)角，510個(gè)氨基酸可形成無(wú)規(guī)則卷曲；功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)顯示，有3個(gè)重復(fù)的SSⅢ家族序列，1個(gè)淀粉合成酶保守催化結(jié)構(gòu)域；通過(guò)亞細(xì)胞定位可知，它是一種含有75個(gè)氨基酸的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽蛋白。 3．構(gòu)建了SSⅢ