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文檔簡介
1、β淀粉樣蛋白(amyloidβpeptide，Aβ)是治療阿爾茲海默氏病的關(guān)鍵靶標(biāo)之一。目前免疫治療使用的免疫原Aβ主要通過化學(xué)方法合成，生產(chǎn)成本高且免疫性弱，不能滿足科研和醫(yī)療對免疫原的需求?；蚬こ碳夹g(shù)為高免疫性Aβ的大量生物合成提供了有效途徑。本文構(gòu)建了Aβ串聯(lián)基因的真核及原核表達(dá)載體，研究了Aβ基因在大腸桿菌的表達(dá)并獲得了轉(zhuǎn)基因煙草，為利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)Aβ疫苗奠定了基礎(chǔ)。 本實(shí)驗依據(jù)人類Aβ基因序列及重疊PCR技術(shù)原
2、理設(shè)計引物，通過PCR擴(kuò)增獲得2個Aβ基因串聯(lián)的DNA片段(2Aβ)；將此片段克隆到載體pGEX-6P-1(GST)中，構(gòu)建了原核表達(dá)載體pGEX-6P-1-Aβ：將此載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21并進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)；利用GST抗體進(jìn)行的Western雜交檢測結(jié)果顯示，GST/Aβ融合蛋白能在大腸桿菌中表達(dá)，但表達(dá)量低而且有降解。 為提高外源基因在植物中的表達(dá)水平，本實(shí)驗構(gòu)建了含雙CaMV35S啟動子及TEV增強(qiáng)子的植物表達(dá)載體pBI
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