草菇開傘基因克隆及反義表達載體構(gòu)建.pdf

1、草菇子實體的發(fā)育大致經(jīng)過以下六個階段:針頭期(Pinhead)、小紐扣期(Tinybutton)、紐扣期(Button)、蛋形期(Egg)、伸長期(Elongation)和成熟期(Mature)<'[1]>.子實體在不同時期的生理特征變化顯著,尤其是在蛋形期進入伸長期時呼吸強度開始急劇增強,子實體的形態(tài)也從未破膜的卵形變成開傘,失去商品價值.是什么原因使草菇子實體在短時間內(nèi)產(chǎn)生這么大的變化?該研究通過細胞形態(tài)變化,激素水平變化以及特異基

2、因的表達等方面進行了探索研究.主要研究及結(jié)果如下:1.細胞伸長主導伸長期子實體菌柄快速伸長顯微觀察草菇子實體菌柄細胞在不同發(fā)育時期以及菌柄不同部位在蛋形期和伸長期的細胞形態(tài)并測量了細胞大小變化,同時通過菌柄標記觀察并測量了子實體菌柄的伸長區(qū)間.結(jié)果表明:在蛋形期草菇主要是通過細胞分裂使細胞數(shù)增加而使子實體長大,從伸長期開始,子實體菌柄伸長的主導因素是菌柄中上部細胞的伸長,同時菌柄頂部細胞的分裂起輔助作用.2.內(nèi)源激素水平變化與子實體生長

3、顯著相關(guān)測量子實體菌柄在不同發(fā)育階段的內(nèi)源激素水平變化,結(jié)果顯示:在蛋形期之前,無論促進生長類激素還是衰老類激素都沒有明顯的變化;但是在伸長期,促進生長類激素GA<,1/3>和ZRs急劇上升到頂峰,衰老類激素ABA則急劇下降;到成熟期,GA<,1/3>和ZRs的含量比伸長期時明顯下降,但仍維持在較高的水平,ABA的濃度在成熟期時下降到最低水平.在不同發(fā)育時期中GA<,1/3>的濃度變化主導GA<,1/3>/ABA的比率變化,GA<,1/

4、3>/ABA可能是主導菌柄細胞生長的重要因素,但子實體進入成熟期后的衰老過程可能有其它控制衰老的生理因子起關(guān)鍵作用.3.克隆到開傘階段特異表達基因片段通過抑制性扣除雜交法,以蛋形期子實體菌柄的Total mRNA為驅(qū)趕子,伸長期子實體菌柄的Total mRNA為目的子,克隆子實體菌柄在伸長期特異表達的基因,結(jié)果得到一個基因片段,測序并登錄GENBANK進行同源性比較,沒有與此序列相同的基因.以該基因片段為模板合成引物并進行基因組DNA擴