IBV安徽分離株生物學(xué)特性及其遺傳變異性的研究.pdf

1、傳染性支氣管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一種急性、高度接觸傳染性、病毒性呼吸道疾病，主要引起雞的呼吸系統(tǒng)疾病、腎炎、伴隨產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)的下降，給養(yǎng)雞業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 2007年～2008年從安徽省七個(gè)地區(qū)懷疑發(fā)生IB的雞群中采集病料23份進(jìn)行病毒分離，通過(guò)雞胚接種、紅細(xì)胞凝集活性試驗(yàn)、動(dòng)

2、物回歸試驗(yàn)、雞胚中和試驗(yàn)和RT-PCR等試驗(yàn)，確定10株分離病毒符合IBV的特征，所分離到的病毒株為IBV，分別命名為AH/HF1、AH/HF2、AH/HF3、AH/CZ、AH/FY、AH/LA、AH/CH、AH/AQ、AH/HN和AH/XC。
　　 采用固定病毒和固定血清稀釋法，10株安徽分離株雞胚血清中和試驗(yàn)表明：AH/HF2株屬于Hotle血清型，與9株安徽分離株有交叉免疫反應(yīng)，與其中5株分離株有完全交叉免疫反應(yīng)；H120

3、陽(yáng)性血清只與2株安徽分離株有完全交叉免疫反應(yīng)。通過(guò)對(duì)AH/HF2株和AH/HN株動(dòng)物回歸試驗(yàn)，病理剖檢變化表明：AH/HF2株主要病變?cè)谏虾粑?、腎臟和腺胃，屬于多致病型，而AH/HN株主要病變?cè)谛∧c和腿肌，屬于嗜腸型，這是安徽省報(bào)道腺胃型和腎型IB后新出現(xiàn)的兩種臨床類(lèi)型。AH/FY株細(xì)胞適應(yīng)能力的培養(yǎng)試驗(yàn)表明：AH/FY株能在Vero細(xì)胞中繁殖并產(chǎn)生細(xì)胞病變，但不能在CEF細(xì)胞中繁殖。
　　 應(yīng)用RT-PCR方法對(duì)10株IBV

4、分離株的主要結(jié)構(gòu)基因進(jìn)行擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物純化回收、克隆、測(cè)序及分析。結(jié)果表明：10株分離株S1基因核苷酸序列由1617bp～1638bp組成，S2基因核苷酸序列由1878bp組成，M基因核苷酸序列由678bp～681bp組成，N基因核苷酸序列由1230bp組成。與我國(guó)IBV分離株、常用IBV疫苗株和國(guó)外IBV毒株的主要結(jié)構(gòu)基因核苷酸序列及推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行比較，安徽IBV分離株的S1基因和M基因存在廣泛的基因突變、缺失或插入現(xiàn)象，S2基

5、因和N基因相對(duì)保守，只存在廣泛的點(diǎn)基因突變。
　　 10株安徽IBV分離株基因同源重組分析，IBV分離株與我國(guó)江蘇、河北、山東、吉林、黑龍江、新疆和廣東等省份部分IBV分離株之間可能發(fā)生直接或間接發(fā)生同源重組。
　　 根據(jù)本研究的10株IBV分離株與我國(guó)IBV分離株、常用IBV疫苗株和國(guó)外IBV毒株的主要結(jié)構(gòu)基因核苷酸序列同源性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析。安徽IBV分離株主要結(jié)構(gòu)基因核苷酸序列之間具有較高的同源性為79.9％～

6、99.9％，S1基因進(jìn)化樹(shù)分析，10株分離株分布在第Ⅰ群里的兩個(gè)不同亞群，親緣關(guān)系很近，形成了獨(dú)立的基因進(jìn)化群；與我國(guó)江蘇、河北、山東、吉林、黑龍江、北京、新疆、廣東和四川的部分IBV分離株同源性較高為81.5％～98.0％，親緣關(guān)系也較近，它們之間組成不同的進(jìn)化群；與我國(guó)常用疫苗株H120、M41、JiLin、D41、28/86、W93等毒株和國(guó)外IBV毒株（除韓國(guó)）同源最低為76.0％～91.7％，親緣關(guān)較遠(yuǎn)，與10株分離株不在同一