安徽省IBV地方株分離鑒定及其主要結(jié)構(gòu)基因的研究.pdf

1、該研究通過雞胚接種、動物回歸試驗、干擾試驗、血凝試驗和電鏡觀察等手段分離鑒定了兩株腎型IBV(分別命名為AH1-99株、AH2-03株).在此基礎(chǔ)上,為了從分子水平上了解安徽省IBV地方株主要結(jié)構(gòu)基因的遺傳變異背景和為防制IBV提供依據(jù),我們利用RT-PCR技術(shù)分別擴增出S1、S2、M和N基因,并將這些基因插入到pMD18-T載體中構(gòu)建了重組質(zhì)粒,隨后對這些基因進行了序列測定和序列分析.比較發(fā)現(xiàn),在四個結(jié)構(gòu)基因中,M基因最為保守,核苷酸

2、同源性為87.2％-95.9％.同多數(shù)參考毒株相比較,AH2-03株在16-18nt處插入了GGA三個堿基.M蛋白由225-226個氨基酸殘基組成,其內(nèi)部有兩個潛在的糖基化位點.分析發(fā)現(xiàn),AH1-99株M基因和S1基因的進化是平行進行的.雖然兩分離株核苷酸有93.4％的相似性,但是在M基因系統(tǒng)發(fā)生樹中,兩者不在同一個基因群內(nèi).同S1基因相似,AH1-99株M基因同H120、M41、Beaudette株以及多數(shù)國內(nèi)分離株親緣關(guān)系近,在同一

3、個基因群內(nèi);而AH2-03株M基因同上述毒株親緣關(guān)系較遠,與少數(shù)國內(nèi)分離株,如SAIB14、GD6-98在另一基因群內(nèi).分離株N基因內(nèi)無堿基的缺失與插入,同絕大多數(shù)IBV毒株一樣,其大小為1230nt,編碼409個氨基酸,與參考毒株N基因核苷酸同源性為85.2％-97.6％.分析顯示,N蛋白大部分由親水性氨基酸組成,富含堿性氨基酸,這些堿性氨基酸多數(shù)成簇集中在63-85aa、198-249aa、330-368aa三個保守的區(qū)域內(nèi).與M4