氣單胞菌安徽分離株的鑒定、毒力基因檢測(cè)及其序列分析.pdf

1、　　本文擬以15株疑似氣單胞菌為研究對(duì)象，采用細(xì)菌數(shù)值鑒定法證實(shí)分離菌為不同表型種氣單胞菌的基礎(chǔ)上，建立了一種可同時(shí)用于氣單胞菌病快速診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查的多重PCR方法，并應(yīng)用該方法檢測(cè)安徽分離株攜帶毒力基因情況，探明我省氣單胞菌的分子流行病學(xué)特征，為該病的快速診斷、監(jiān)測(cè)和綜合防治提供方法和科學(xué)依據(jù)?！　∈紫?，采用細(xì)菌數(shù)值鑒定法和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)15株分離菌進(jìn)行數(shù)值鑒定和致病性測(cè)定。研究中采用革蘭氏陰性桿菌七位編碼鑒定試劑盒對(duì)分離菌進(jìn)行

2、數(shù)值鑒定，結(jié)果顯示15株分離菌均為氣單胞菌，但表型種有所不同。　　其次，建立用于氣單胞菌病快速診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查的MPCR方法。研究中以粘附素基因(aha1)、溶血素基因(hly)和腸毒素基因(alt)三種主要毒力基因的高度保守區(qū)設(shè)計(jì)合成特異性引物并通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件，建立了MPCR方法。該方法在12h內(nèi)即可從病料中或分離菌中檢測(cè)出一種或任何組合的氣單胞菌毒力基因，其特異性強(qiáng)，敏感度達(dá)102cfu·mL-1?！　≡俅危瑧?yīng)用MPCR

3、方法檢測(cè)安徽分離株攜帶毒力基因情況，確定其分子流行病學(xué)特征。研究中分別提取細(xì)菌基因組DNA作為模板，進(jìn)行alt、hly和ahal毒力基因MPCR擴(kuò)增。表明alt基因廣泛存在于不同表型種氣單胞菌中，alt+ahal+hly+基因型是其主要毒力基因型?！　∽詈?，選取具有代表性的6株氣單胞菌，對(duì)其毒力基因進(jìn)行克隆測(cè)序。研究中設(shè)計(jì)合成針對(duì)aha1、hly和alt基因完整開(kāi)放閱讀框(ORF)的特異性引物，對(duì)毒力基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物與p