氣單胞菌的毒力基因檢測(cè)及環(huán)境因子對(duì)毒力基因表達(dá)的影響.pdf

1、氣單胞菌是導(dǎo)致水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物感染疾病的重要病原菌，對(duì)淡水養(yǎng)殖業(yè)造成了非常大的經(jīng)濟(jì)損失。論文基于前期對(duì)安徽地區(qū)出血性病魚樣本中氣單胞菌的分離鑒定的基礎(chǔ)上，檢測(cè)了8個(gè)毒力基因在氣單胞菌體內(nèi)的分布情況，并研究了環(huán)境因子(溫度、pH值、鹽度)對(duì)氣單胞菌生長(zhǎng)及其毒力基因表達(dá)的影響。研究結(jié)果有助于了解氣單胞菌中毒力基因的分布以及闡明環(huán)境因子影響氣單胞菌感染疾病的發(fā)生機(jī)理，以期提供有效的生態(tài)學(xué)防治措施，對(duì)提高水產(chǎn)食品安全性以及促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)

2、展提供理論支撐。
　　1.毒力基因的檢測(cè)：將從各類病魚體內(nèi)分離鑒定出的氣單胞菌接種培養(yǎng)并提取DNA，根據(jù)GenBank中已登錄的氣單胞菌核苷酸序列，設(shè)計(jì)并合成了八對(duì)特異性引物，包括氣溶素基因Aer，彈性蛋白酶基因Ahy-B，細(xì)胞毒性腸毒素基因Act，細(xì)胞興奮性腸毒素基因Alt，溫敏胞外蛋白酶基因Epr，熱穩(wěn)定腸毒素基因Ast，脂肪酶基因Lip，彈性蛋白酶基因Ela，通過PCR技術(shù)，擴(kuò)增各類基因片段，通過瓊脂糖凝膠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)電泳結(jié)果，

3、結(jié)果顯示58株氣單胞菌中，含Epr基因的占34.5%(20/58)，含Alt基因的占24.1%(14/58)，含Lip基因的占75.9%(44/58)，含Act基因的占81%(47/58)，含Ela基因的占62%(36/58)，含AhyB基因的占62%(36/58)，含Ast基因的占34.5%(20/58)，含Aer基因的占41.4%(24/58)；對(duì)應(yīng)每種毒力基因，選擇一株結(jié)果為陽性的菌株，結(jié)果為：①.Aer-47；②.Ela-47；

4、③.Ahy-B-35；④.Act-56；⑤.Lip-17；⑥.Epr-17；⑦.Ast-17；⑧.Alt-50，共計(jì)5株。
　　2.五株菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定：為了了解氣單胞菌的生長(zhǎng)情況，對(duì)上一章篩選出的5株菌株進(jìn)行了生長(zhǎng)曲線的測(cè)定。環(huán)境因子包括pH值、鹽度以及溫度，通過測(cè)定OD值以及采用活菌平板計(jì)數(shù)法，掌握了待測(cè)菌株的生長(zhǎng)狀況。在pH這一影響因子方面，氣單胞菌在中性環(huán)境中生長(zhǎng)能力最強(qiáng)，其次是酸性環(huán)境，對(duì)堿性環(huán)境的耐受性最差；在鹽度方

5、面，除了35號(hào)菌株受鹽度升高抑制最為明顯外，其他4株菌隨著鹽度的增加，其生長(zhǎng)是逐漸受到抑制的；而在溫度方面，低溫對(duì)嗜水氣單胞菌的影響明顯，15℃時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)較為緩慢，而當(dāng)溫度由15℃逐漸升高至35℃左右時(shí)，細(xì)菌的生長(zhǎng)也開始加快。
　　3.環(huán)境因子對(duì)毒力基因表達(dá)的影響：研究環(huán)境因子對(duì)氣單胞菌毒力基因表達(dá)的影響，對(duì)深入了解氣單胞菌的致病機(jī)理非常重要，通過設(shè)置pH值、鹽度以及溫度這三個(gè)環(huán)境因子以達(dá)到了解其機(jī)理的目的。由生長(zhǎng)曲線圖可以了解曲