DCV H基因遺傳變異性分析與表達(dá)水貂SLAM受體Vero細(xì)胞的初步構(gòu)建.pdf

1、PhylogeneticanalysisofthehaemagglutiningeneofcaninedistempervirusandinitialestablishmentofVerocelllineexpressingminkSLAMreceptorThesisubmittedt01heslssul9Q／ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDe

2、greeof—MasterofAgronomyZhangHongliang(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：ProfiShanHuQingdao，ChinaJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要犬瘟熱病毒H基因遺傳變異性分析與表達(dá)水貂SLAM受體Vero細(xì)胞系的初步構(gòu)建摘要犬瘟熱病毒(Caninedistempervirus，CDn在分類上屬于副黏病毒

3、科(Paramyxoviridae)、麻疹病毒屬(Morbillivirus)，是引起犬科、鼬科及一部分浣熊科或其它食肉目動物犬瘟熱(CaninedistemperCTD)的一種單鏈RNA病毒。CDV與犬細(xì)小病毒(CanineParvovirusCP功、水貂腸炎病毒(Minkenteritisvirus，MEV)常在寵物犬和毛皮動物上發(fā)生混合感染，在已免疫群體中癥狀往往不典型，難以從臨床癥狀上做出準(zhǔn)確的診斷。CDV的主要抗原蛋白之一血凝

4、素蛋白(H)，在整個病毒基因組中的變異率是最高的，其基因常作為CDV的分型依據(jù)，并且蛋白糖基化可影響病毒的抗原性，因此進(jìn)行H基因的測序分析，對于犬瘟熱的流行病學(xué)監(jiān)測和抗原性分析具有重要的意義。但是CDV作為具有囊膜的RNA病毒，對于光熱等環(huán)境因素敏感，易被滅活，難以用傳統(tǒng)的細(xì)胞系進(jìn)行分離培養(yǎng)，限制了對CDV在感染機(jī)制、疫苗、治療性藥物等方面的深入研究。本文主要從以下三方面開展了相關(guān)研究：試驗一犬瘟熱病毒和細(xì)小病毒雙重PCR檢測方法的建立

5、及初步應(yīng)用本研究根據(jù)CDV核蛋白(N)基因和CPV、MEV結(jié)構(gòu)蛋白VP2基因的相對保守區(qū)設(shè)計了兩對特異性引物，經(jīng)試驗條件的優(yōu)化，建立了同時檢測CDV和CPV／MEV的雙重PCR方法。通過檢測36份臨床樣品，對雙重PCR方法和膠體金試紙條方法進(jìn)行了對比試驗。結(jié)果表明，建立的雙重PCR方法特異性強(qiáng)、敏感性高，可擴(kuò)增出563ng的總核酸量；與試紙條方法相比，雙重PCR方法對CDV檢出率提高了556％，對CPV／MEV檢出率提高了278％。說明

6、該方法可用于檢測寵物犬和毛皮動物CDV和CPV／MEV的混合感染。試驗二鑒別CDV疫苗株與野毒株RTPCRRFLP方法的建立及H基因測序分析CDV野毒株H基因中有一個或兩個NdeI酶切位點，而疫苗株H基因中缺少這個酶切位點。因此通過這個酶切位點的差異，可以用來區(qū)分CDV疫苗株與野毒株。本研究設(shè)計了擴(kuò)增H基因的一對特異性引物，并利用RFLP分析技術(shù)建立了用于區(qū)分CDV疫苗株與野毒株RTPCRRFLP檢測方法，對20102011年間水貂、貉