威海地區(qū)水貂阿留申病的臨床檢測(cè)及其病毒遺傳變異分析

1、Q ' n g d a o A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t yP r o f e s s i o n a lM a s t e r D e g r e eT h e s i s o f V e t e r i n a r yM e d i c i n eC l i n i c a lT e s t i n g a n d V i r a l G e n e t i c V a

2、r i a t i o nA n a l y s i so f A l e u t i a n D i s e a s e o f M i n k i nW e i h a ia r e aG r a d u a t ew i m P r o f e s s i o n a lM a s t e r D e g r e e ：M e n t o r ：眙n J i a n x i nS e c o n d M e n t o r ：S

3、u n X u e j u nT y p e o f P r o f e s s i o n a lD e g r e e ：M a s t e r o f V e t e r i n a r yM e d i c i n eQ i n g d a o ．C h i n aJ u n e ，2 0 1 4威海地區(qū)水貂阿留申病的臨床檢測(cè)及其病毒遺傳變異分析摘 要水貂阿留申病( A l e u t i a nd i s e a s e ，A

4、 D ) 是由水貂阿留申病毒( A l e u t i a nd i s e a s ev i r u s ，A D V ) 引發(fā)的水貂慢性的、傳染性疾病，主要給水貂的免疫系統(tǒng)造成傷害，特征為持續(xù)性的病毒血癥和漿細(xì)胞彌漫性的增生。在我國(guó)，水貂阿留申病普遍存在于飼養(yǎng)水貂的各個(gè)省份，其在臨床上主要表現(xiàn)為腎小球腎炎、動(dòng)脈血管炎、肝炎，造成水稻產(chǎn)仔量降低、死胎、流產(chǎn)，并導(dǎo)致成年水貂的免疫系統(tǒng)紊亂，仔貂突發(fā)嚴(yán)重肺炎而死亡。本實(shí)驗(yàn)分別從威海不同的水

5、貂養(yǎng)殖場(chǎng)抽取樣本。通過對(duì)碘凝集法( I A T ) 、對(duì)流免疫電泳法和P C R 法這三種實(shí)驗(yàn)室診斷方法的比較，來確定臨床優(yōu)選的檢測(cè)方法。對(duì)2 1 6 4個(gè)疑似阿留申病水貂的血液進(jìn)行檢測(cè)，旨在檢測(cè)出該地區(qū)水貂阿留申病的陽性率。將血液樣本進(jìn)行碘凝集實(shí)驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)，通過這兩種通用的檢測(cè)方法完成對(duì)水貂阿留申病毒的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示該地區(qū)水貂阿留申病的陽性率為7 1 ．2 4 ％，阿留申病發(fā)病情況較為嚴(yán)重。建議將確診的不同舍的陽性種用水

6、貂淘汰，從而控制整個(gè)場(chǎng)內(nèi)的陽性率，降低水貂養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)損失。從選自威海不同地區(qū)的三份陽性病料中提取阿留申病毒D N A ，分別命名為A D V - W D I 、A D V - w D 2 、A D V —R C 。通過P C R 方法擴(kuò)增V P 2 部分基因，參考G e n B a n k 已經(jīng)發(fā)表的A D V 序列，利用生物學(xué)軟件將所測(cè)毒株與國(guó)內(nèi)外流行毒株進(jìn)行核酸和氨基酸同源性比較，構(gòu)建生物進(jìn)化樹。結(jié)果表明：A D V —W D I

7、 、A D V - W D 2 、A D V —R C 與中國(guó)己分離毒株A D V —L N I 核酸同源性最高，其中A D V - E ) I 與A D V - L N I 核酸同源性9 5 ．2 ％；A D V —W D 2 與A D V - L N I 核酸同源性9 5 ．6 ％；A D V - R C 與A D V - L N I 核酸同源性9 4 ．5 ％。A D V - E ) 1 、A D V - W D 2 、A D V

8、 - R C 與A D v ．L N l相關(guān)片段的氨基酸同源性最高，其中A D V - W D I 與A D V —L N l 氨基酸同源性8 7 ．6 ％；A D V - E ) 2與A D v - L N l 氨基酸同源性8 9 ．5 ％；A D v - R C 與A D v - L N l 氨基酸同源性8 6 ．7 ％。本試驗(yàn)有助于了解目前流行于山東威海A D V 的毒株類型，為后續(xù)深入研究診斷抗原和相關(guān)A D V 疫苗提供理論依