中國水仙凝集素基因的克隆與表達.pdf

1、農業(yè)害蟲對農業(yè)生產存在著嚴重危害。通過化學農藥對害蟲進行毒殺的效果雖然顯著,卻帶來了農藥殘留、環(huán)境污染和生態(tài)平衡等問題。近年來，應用基因克隆和轉基因技術進行抗蟲植物育種研究，為控制農業(yè)害蟲提供了新的思路。石蒜科植物凝集素具有很好的抗蟲效果,其中的雪花蓮凝集素基因已被應用于抗蟲植物育種。中國水仙凝集素對一些刺吸式昆蟲有著很好的抑制作用，因此，克隆其凝集素基因，研究其抗蟲功能，可為進一步開展抗蟲植物育種提供有價值的參考。
　　 本研

2、究從中國水仙‘金盞銀臺'中克隆出了一個凝集素基因，構建了雙子葉植物表達載體，并成功將其轉化到煙草和擬南芥中，得到了轉基因植株；構建了原核表達載體，在大腸桿菌中高效表達了該凝集素蛋白。主要結果如下：
　　 1．利用RT-PCR技術從中國水仙(Narcissus tazetta var．Chinensis)‘金盞銀臺'中克隆到一個新的編碼凝集素的基因NTL1。序列分析與預測結果表明，該基因 cDNA片段總長為609 bp，含有一個由

3、25個氨基酸殘基組成的信號肽和一個519 bp的完整開放閱讀框；編碼172個氨基酸，分子量為18.7 kD；前體蛋白在氨基酸水平上與雜種多花水仙凝集素、雪花蓮凝集素、石蒜凝集素的一致性分別為83％、81％和77％；結構預測顯示，其二級結構以α-螺旋、不規(guī)則盤繞和延伸鏈為主；三級結構與雪花蓮凝集素極其相似，是一種能與α-D-甘露糖特異性結合的凝集素。
　　 2．利用RT-PCR方法，以18S rRNA作為內參基因，研究了NTL1基

4、因在中國水仙中的組織特異性表達模式，發(fā)現(xiàn)NTL1基因在根、鱗葉、葉片與花器官均有表達。
　　 3.采用直接添加酶切位點的方法，將NTL1基因構建到雙元表達載體pBI121的多克隆位點，形成由35S啟動的植物表達載體。分別采用葉盤法和蘸花法轉化煙草和擬南芥，獲得了抗性植株。經PCR檢測，證明獲得了轉NTL1基因植株，并對轉基因擬南芥T1代植株進行了分析，初步確定NTL1基因在煙草和擬南芥中得到表達。
　　 4．以pET-2