中國水仙MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與表達分析.pdf

1、中國水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)是多年生草本植物，石蒜科水仙屬，為我國的傳統(tǒng)名花之一，但是其花色單一、品種匱乏，限制了水仙產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前對中國水仙花色形成機理的研究尚不深入，其呈色的分子機理還不明確。MYB類轉(zhuǎn)錄因子在植物花色素形成過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控功能，現(xiàn)在大部分的研究成果都是轉(zhuǎn)錄激活子的應用，這在許多植物中都得到廣泛的驗證，然而對于花青素合成過程中存在的具有抑制作用的MYB轉(zhuǎn)錄因子的研

2、究卻很少。本研究以‘金盞銀臺’為材料，利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆出可能對其花色形成有調(diào)控作用的 MYB基因，通過熒光定量 PCR技術(shù)分析其在中國水仙成花過程中的不同時期的相對表達水平，并對其構(gòu)建反義表達載體，農(nóng)桿菌介導入水仙受體系統(tǒng)，進行相關的表達研究。研究結(jié)果對中國水仙的花色改良探索具有一定意義。主要研究結(jié)果如下：
　　1.利用同源克隆技術(shù)從中國水仙‘金盞銀臺’花瓣中克隆得到4條MYB基因，序列分析表明，MYB1基因全長

3、842bp，其中開放閱讀框共有681bp，編碼226個氨基酸，命名為NtMYB1，在Gengbank中的登錄號為KC763973；MYB2基因全長1067bp，其中開放閱讀框共有633bp，編碼210個氨基酸，命名為NtMYB2，在GeneBank中的登錄號為KC763974；MYB3基因全長805bp，其中開放閱讀框共有606bp，編碼201個氨基酸，命名為NtMYB3，在GeneBank中的登錄號為KC763975；MYB4基因全長

4、1182bp，其中開放閱讀框共有855bp，編碼284個氨基酸，命名為NtMYB4，在GeneBank中的登錄號為KC763976。
　　2.以中國水仙 Actin基因為內(nèi)參基因，通過熒光定量轉(zhuǎn)錄表達分析發(fā)現(xiàn)，4個MYB基因在中國水仙成花過程中的表達水平均有明顯差異。除了花苞期表達量很低，NtMYB1基因在其他5個時期的表達量都很高，且呈現(xiàn)逐步下降的趨勢；NtMYB2基因的表達水平隨著花形成的時間推移而下降，且在盛花期、開花后期和