植物抗大麗輪枝菌受體類蛋白基因及甘露糖結(jié)合型凝集素基因的克隆與表達(dá).pdf

1、一、海島棉多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因Gbpgip全長cDNA的克隆;二、海島棉多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因Gbpgip的啟動(dòng)子區(qū)、終止子區(qū)和全長基因組序列的克隆;采用的Gbpgip全長cDM的兩端序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增海島棉基因組DNA的結(jié)果表明,在與全長cDNA對(duì)應(yīng)的基因組序列中不存在內(nèi)含子.三、類番茄茄抗大麗輪枝菌受體蛋白基因成員SlVe1全長cDNA序列和基因組序列的克隆;四、類番茄茄抗大麗輪枝菌受體蛋白基因成員SlVe2全長cDNA

2、序列和基因組序列克隆;由于從文庫cDNA中沒有直接擴(kuò)增到與Ve2對(duì)應(yīng)的同源基因序列,我們采用了SlVe1對(duì)應(yīng)前面所說的保守區(qū)685bp片斷為探針,采用隨機(jī)引物法進(jìn)行α<'32>P標(biāo)記,對(duì)類番茄茄cDNA文庫進(jìn)行兩輪篩選,成功克隆到與Ve2對(duì)應(yīng)的同源基因家族成員SlVe2.五、文殊蘭甘露糖結(jié)合型凝集素基因Caa全長cDNA的克隆;根據(jù)單子葉甘露糖結(jié)合型凝集素的糖結(jié)合位點(diǎn)處保守性氨基酸序列MQDDCNL設(shè)計(jì)出一條保守引物用于3'RACE(r

3、apidamplificationofcDNAends),以文殊蘭葉片總RNA為材料,克隆獲得其cDNA的3'末端.六、Gbpgip、SlVe1、SlVe2和Caa等全長cDNA的植物表達(dá)載體構(gòu)建; 采用pCAMBIA2301作為表達(dá)載體骨架,將用HindIII+EcoRI雙酶切從pBI121質(zhì)粒上切下的gus基因表達(dá)盒(3032bp)連接到用同樣雙酶切開環(huán)的pCAMBIA2301的多克隆位點(diǎn)中,形成中間載體pCAMBIA2301G.七