大麗輪枝菌VdLac基因的克隆與功能分析.pdf

1、大麗輪枝菌是一種典型的土傳病原真菌，寄主范圍廣泛。微菌核是大麗輪枝菌的主要休眠結(jié)構(gòu)，抗逆性強(qiáng)，可在沒(méi)有寄主的情況下存活14年，這與其體內(nèi)含有豐富的黑色素密切相關(guān)。黑色素是一種由酚類或吲哚類化合物組成的帶有負(fù)電荷的疏水性高分子聚合物，能夠保護(hù)真菌免受環(huán)境和寄主的影響。漆酶是黑色素合成通路中的關(guān)鍵酶，在真菌生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。本文通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化和PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法對(duì)大麗輪枝菌中的漆酶基因VdLac進(jìn)行了敲除

2、和互補(bǔ)，研究漆酶基因在大麗輪枝菌中的主要功能。結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)NCBI上已公布的VdLs.17的基因組序列，克隆得到漆酶基因VdLac序列，VdLac基因全長(zhǎng)1978 bp，cDNA序列全長(zhǎng)1713 bp，編碼570個(gè)氨基酸。
　　2.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法(ATMT)對(duì)VdLac進(jìn)行敲除，并通過(guò)潮霉素抗性篩選和PCR檢測(cè)確定陽(yáng)性敲除突變體，獲得了4個(gè)敲除突變體。
　　3.通過(guò)PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法