馬蹄蓮、石斛和姜凝集素基因的克隆及分析.pdf

1、凝集素是一類含有至少一個非催化結(jié)構(gòu)域并能可逆結(jié)合到特異單糖或寡糖上的蛋白質(zhì)。為了挖掘更多更有效的抗病、抗蟲基因，本文對植物凝集素基因進行研究，以馬蹄蓮、石斛和姜為材料，利用RACE-PCR技術(shù)，成功地從中克隆出了凝集素基因，并對其功能進行了研究，得到如下結(jié)果：1.首次從天南星科植物馬蹄蓮中克隆了馬蹄蓮凝集素基因zaa，并發(fā)現(xiàn)zaa是由一個多基因家族編碼的。2.克隆了馬蹄蓮凝集素基因的包含啟動子區(qū)、終止子區(qū)和全長基因組序列，并對其啟動子區(qū)

2、基本活性元件和抗病相關(guān)的元件以及其它的元件進行了預測。啟動子區(qū)具有核心啟動子，終止子富含A+T序列，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，具備終止子的特征。3.構(gòu)建了zaa基因的植物表達載體pCAMBIA1304-zaa并導入到根癌農(nóng)桿菌EHA105中，對煙草進行了轉(zhuǎn)化。4.從蘭科植物鐵皮石斛中克隆了石斛凝集素基因doa1和doa2。5.首次從姜科植物姜中克隆了姜凝集素基因zoa，姜凝集素基因的全長為768bp，含有一個510bp的開放閱讀框，編碼169個氨基

3、酸。分析表明，姜凝集素屬于單子葉甘露糖結(jié)合的凝集素，該研究不僅把這一家族凝集素(甘露糖結(jié)合凝集素)延伸到了姜科，而且有助于進一步研究凝集素的進化關(guān)系。6.分別構(gòu)建了含aha(天南星凝集素)、doa2和zoa基因的原核表達載體，并成功地實現(xiàn)了這三個基因在E.coli中的表達，并對其重組的蛋白進行了純化。從植物中提取了天然的AHA和ZOA，作為對照進行了凝血活性實驗。結(jié)果表明重組AHA和ZOA具有和天然蛋白一樣的凝血活性。抑菌實驗表明，重組