彩色馬蹄蓮病毒的分子檢測和鑒定.pdf

1、彩色馬蹄蓮(Callalily，Zantedeschia.spp)是世界馳名的切花，廣泛分布于世界各地。近幾年來，隨著我國彩色馬蹄蓮栽培規(guī)模不斷擴(kuò)大和從國外大量引種，導(dǎo)致彩色馬蹄蓮遭受病毒侵染和衰退的現(xiàn)象越來越嚴(yán)重。然而，目前在國內(nèi)關(guān)于彩色馬蹄蓮病毒病的報(bào)道很少，因此對(duì)其進(jìn)行研究，以及建立一套快速、準(zhǔn)確的彩色馬蹄蓮病毒檢測技術(shù)，對(duì)搞清彩色馬蹄蓮病毒病害的組培脫毒、有效防治、種苗檢疫以及增加出口創(chuàng)匯將具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究運(yùn)用生物學(xué)

2、和分子生物學(xué)的方法對(duì)侵染甘肅省部分地區(qū)彩色馬蹄蓮的植物病毒進(jìn)行了系統(tǒng)研究。研究的主要內(nèi)容包括調(diào)查了解彩色馬蹄蓮病毒病的發(fā)生和侵染情況、通過電鏡觀察海芋嵌紋病毒(ZaMV)的粒子形態(tài)及內(nèi)含體的有無和形態(tài)、植物總RNA的提取及RT-PCR檢測體系的建立、外殼蛋白基因的克隆和同源性分析。結(jié)果表明ZaMV是在自然環(huán)境下侵染甘肅省彩色馬蹄蓮的主要病毒，它屬于馬鈴薯Y病毒屬。 田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)甘肅省彩色馬蹄蓮普遍受到病毒侵染，在嘉峪關(guān)市溫室種植

3、區(qū)發(fā)病最為嚴(yán)重，發(fā)病率高達(dá)80.9﹪，而在榆中縣和臨洮縣發(fā)病率相對(duì)較低，分別為28.1﹪和27.5﹪，而且彩色馬蹄蓮病毒病癥狀相當(dāng)復(fù)雜，主要有花葉、斑駁、畸形等。寄主反應(yīng)試驗(yàn)表明：侵染彩色馬蹄蓮的植物病毒的寄主范圍很窄，主要侵染天南星科植物，所以難以通過寄主反應(yīng)對(duì)它們進(jìn)行鑒定。電鏡檢測結(jié)果表明：在38個(gè)樣品中有20個(gè)樣品被線狀病毒侵染，侵染率達(dá)52.6﹪；組織病理學(xué)觀察結(jié)果顯示：在20個(gè)被線狀病毒侵染的樣品中有12個(gè)樣品檢測到風(fēng)輪狀內(nèi)含

4、體，表明受到馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)病毒成員的侵染，侵染率達(dá)60﹪。 通過提取感病彩色馬蹄蓮葉片組織中的總RNA，并設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行基因克隆，獲得ZaMV病毒衣殼蛋白(CP)的基因序列。結(jié)果顯示ZaMV的克隆片斷全長為833bp，其中CP基因由579bp的組成，另外有254bp組成的3’-末端非編碼區(qū)。對(duì)ZaMV同馬鈴薯Y病毒屬一些種和已知的ZaMV進(jìn)行同源性比較和進(jìn)化樹分析表明，ZaMV

5、的CP序列和馬鈴薯的Y病毒屬成員之間核苷酸有56.0﹪～62.4﹪的同源性，氨基酸有51.8﹪～62.1﹪之間的同源性。而且同源性分析的結(jié)果也顯示ZaMV與李痘病毒(PPV)和蕪菁花葉病毒(TuMV)屬于同族，而與ZaMV和芋花葉病毒(DsMV)這兩種能同時(shí)侵染天南星科植物的病毒在并不表現(xiàn)出親緣關(guān)系，幾乎沒有同源性，這些結(jié)果和已經(jīng)報(bào)道的結(jié)果相一致。ZaMV和國內(nèi)外已經(jīng)報(bào)道的ZaMV相比，有93﹪以上的同源性，而且大多數(shù)氨基酸的改變發(fā)生在