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文檔簡介
1、本研究以‘美人指’葡萄(Vitis vinifera L‘Manicure Finger’)為材料,在已建立的‘美人指’葡萄不定芽再生體系的基礎上,采用農桿菌介導法以及花粉管通道法,將iaaM基因導入‘美人指’葡萄中,以期獲得定向改良目的性狀的‘美人指’葡萄新種質。本實驗系統(tǒng)探討了影響‘美人指’葡萄遺傳轉化效率的因子,優(yōu)化了農桿菌介導法的主要技術參數,研究結果如下:
1.以‘美人指’葡萄莖段、葉柄、葉片為農桿菌介導轉化ia
2、aM基因的受體,對影響遺傳轉化的一系列因子:農桿菌浸染時間、共培養(yǎng)時間、卡那霉素選擇壓、頭孢霉崇濃度等進行了研究。結果表明:農桿菌侵染4min,共培養(yǎng)3d,卡那霉素選擇壓3mg/L,頭孢霉素濃度250mg/L為最佳的農桿菌介導‘美人指’葡萄的遺傳轉化體系。
2.通過超聲波輔助農桿菌介導法,對‘美人指’葡萄遺傳轉化體系進行研究,以期提高轉化效率。利用GUS瞬時表達的方法研究了不同處理功率、時間、外植體類型及AS濃度對‘美人指
3、’葡萄遺傳轉化效率的影響。結果表明,外植體莖段在含75mg/LAS農桿菌懸浮液中侵染4min,并在此期間,用功率為90w的超聲波處理14s,獲得最佳GUS瞬時表達率42.8%。
3.采用優(yōu)化的農桿菌介導轉化體系,對‘美人指’葡萄進行轉化,共獲得7株抗性苗。利用GUS組織化學染色、PCR擴增及RT-PCR檢測,結果表明,2株抗性植株GUS染色和PCR檢測呈陽性,其中1株通過RT-PCR檢測,初步證實iaaM基因已經整合到‘美
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