葡萄白藜蘆醇合成酶基因的克隆及轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、白藜蘆醇是植物在惡劣環(huán)境下或遭到病原體侵害時(shí)產(chǎn)生的一種次生代謝物,具有預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤作用、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)等重要生理功能。白藜蘆醇合成酶是白藜蘆醇生物合成途徑的關(guān)鍵酶,催化1分子4-香豆烯輔酶A(p-coumaroyl-COA)和3分子丙二酰輔酶A(malonyl-CoA)形成白藜蘆醇。
　　 本研究從葡萄中克隆出白藜蘆醇合成酶基因,構(gòu)建其雙T-DNA植物表達(dá)載體(可消除轉(zhuǎn)基因植物中選擇標(biāo)記基因帶來的安全隱患),并遺傳轉(zhuǎn)

2、化到水稻中,使其在水稻的胚和糊粉層中特異性高效表達(dá),有望創(chuàng)制出稻米中含有白藜蘆醇的功能稻新種質(zhì),進(jìn)而有效提高稻米的附加值,擴(kuò)大稻米(米糠)的利用范圍。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)白藜蘆醇合成酶基因的克隆:采用RT-PCR技術(shù),從葡萄品種“GQ”的葉片中克隆獲得白藜蘆醇合成酶基因RS。與登錄號為XM002265296.1等的核酸序列比對,同源性達(dá)99％,葡萄RS基因全長1,179bp,編碼392個(gè)氨基酸。

3、>　　 (2)RS基因雙T-NDA植物表達(dá)載體的構(gòu)建:構(gòu)建了含有RS基因的雙T-NDA植物表達(dá)載體pcdmar-ole18-RS,該載體的一個(gè)T-DNA區(qū)含有潮霉素抗性基因hpt;另一個(gè)T-DNA區(qū)含有RS基因,由水稻Ole18基因啟動子驅(qū)動RS基因表達(dá),同時(shí)RS基因表達(dá)框的兩側(cè)連有兩段正向重復(fù)的煙草Rb7MARs,以增強(qiáng)RS基因的表達(dá)。
　　 (3)轉(zhuǎn)RS基因水稻的獲得:采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法,將重組表達(dá)載體導(dǎo)入到優(yōu)質(zhì)水稻品種