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1、對(duì)中國(guó)野葡萄醛脫氫酶(ALDH)基因進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥的研究。取得的主要成果如下: 1.以課題組前期研究獲得的重組質(zhì)粒pGEM-T-ALDH為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增ALDH基因片段,將其與pENTR/D-Topo載體連接后獲得入門(mén)克隆載體pENTR/D-ALDH,將pENTR/D-ALDH與質(zhì)粒pHellsgate8進(jìn)行LR反應(yīng)后獲得葡萄ALDH基因的植物干擾表達(dá)載體pHellsgate8-ALDH。 2.將質(zhì)粒pWR3
2、06中包含ED35s啟動(dòng)子、Omega元件及TNOS終止子的一段核苷酸序列定向克隆到質(zhì)粒pCAMBIA1300,構(gòu)建了中間過(guò)量表達(dá)載體pWR-Ⅱ;將重組質(zhì)粒pGEM-T-ALDH的ALDH基因片段定向克隆到中間過(guò)量表達(dá)載體pWR-Ⅱ,構(gòu)建了葡萄ALDH基因的植物過(guò)量表達(dá)載pWR-Ⅱ-ALDH。 3.以農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸沾法轉(zhuǎn)化擬南芥,分別獲得了卡那霉素抗性株系20株和潮霉素抗性株系9株。PCR檢測(cè)證明:卡那霉素抗性株系中7個(gè)為陽(yáng)
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