甘露醇-1-磷酸脫氫酶基因（mtl D）轉(zhuǎn)化擬南芥初探.pdf

1、擬南芥作為模式植物和經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)材料，被廣泛地應(yīng)用于植物生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，使植物生物學(xué)的基礎(chǔ)理論研究取得了突破性的進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)是將耐鹽性相關(guān)的甘露醇—1—磷酸脫氫酶基因（mtl D）插入真核表達(dá)載體pBin438中，構(gòu)建成真核表達(dá)重組質(zhì)粒pBGH。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花浸法將重組質(zhì)粒pBGH轉(zhuǎn)化擬南芥，通過(guò)30 mg/L Kan抗性培養(yǎng)基篩選得到8株抗性苗。將這8株小苗移栽到小盆中培養(yǎng)，其中一株死亡。提取存活7株的葉片DNA進(jìn)行外源mtl

2、D基因的PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中5株檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為70％。轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生擬南芥相比，表型上發(fā)生了一些變化，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：（1）轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片比野生型的葉片要小，并且整個(gè)植株葉片數(shù)目相對(duì)較少；（2）轉(zhuǎn)基因擬南芥開(kāi)花期比野生型擬南芥晚了6—10 d左右；（3）轉(zhuǎn)基因擬南芥植株矮化，主莖不很明顯；（4）轉(zhuǎn)基因擬南芥存在不同程度的花粉敗育現(xiàn)象，成熟后果莢數(shù)量少，并且果莢長(zhǎng)度比野生型要小得多，種子量亦少。 單株收獲轉(zhuǎn)

3、基因擬南芥T1代種子點(diǎn)播到含有NaCl0．8％的培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)20d生長(zhǎng)，對(duì)照擬南芥全部表現(xiàn)為植株矮小，根系不發(fā)達(dá)，而轉(zhuǎn)基因擬南芥其后代出現(xiàn)了一定的分離，表現(xiàn)為有的植株健壯，有的植株和對(duì)照一樣矮小。對(duì)在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的健壯植株和矮小植株進(jìn)行mtlD基因的PCR檢測(cè)，健壯植株表現(xiàn)為陽(yáng)性，矮小植株表現(xiàn)為陰性。取在含有NaCl0．8％的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)健壯的T2代植株和對(duì)照植株進(jìn)行甘露醇含量的測(cè)定，結(jié)果顯示，長(zhǎng)勢(shì)良好的T2代植株中甘露醇含量比對(duì)照