琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病基因突變研究.pdf

1、琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病(succinic semialdehyde dehydrogenase defeciency,SSADH defeciency)是一種少見的常染色體隱性遺傳代謝異常性疾病，由SSADH缺陷引起。此病主要在嬰幼兒起病，臨床表現(xiàn)多樣化，最多見于神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)異常，主要包括發(fā)育延遲（其中動作語言發(fā)育落后最為突出）、輕度至中度智力障礙、肌張力低下、行為異常（如孤獨癥樣表現(xiàn)，年長兒往往存在焦慮、幻覺）、癲癇、運動過度、共濟失

2、調(diào)和反射減弱或消失等。SSADH編碼基因為ALDH5A1，定位于6號染色體短臂2區(qū)2帶。目前基因型與臨床表型相關(guān)性報道較少，國內(nèi)尚無ALDH5A1基因突變的相關(guān)報道。
　　目的:
　　對SSADH缺陷病患兒及家系成員的ALDH5A1基因進行突變分析，明確患兒基因突變位點及家系中突變位點的攜帶情況;為SSADH缺陷病患者家系的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供實驗方法和新的診斷依據(jù)，阻止疾病在家系中的蔓延;提供研究群體的ALDH5A1基因

3、突變數(shù)據(jù)，探討中國人群ALDH5A1基因突變種類及特點，豐富中國人群SSADH缺陷病基因突變數(shù)據(jù)庫資料;也為新生兒篩查項目的遴選提供重要數(shù)據(jù)，從而達到優(yōu)生優(yōu)育的目的;結(jié)合臨床數(shù)據(jù)深入認識患者的臨床表型，探討SSADH缺陷病基因型與臨床表型之間相關(guān)性，以利于SSADH缺陷病發(fā)病機制研究。
　　方法:
　　1.收集整理分析SSADH缺陷病患兒臨床病史資料和主要檢查結(jié)果。
　　2.應用聚合酶鏈式反應(PCR)和直接測序法對S

4、SADH缺陷病患兒ALDH5A1基因各個外顯子及其兩側(cè)部分內(nèi)含子序列進行突變檢測分析。
　　3.對檢測到的突變用PCR-直接測序方法對患兒父母進行突變攜帶情況檢測分析。
　　4.針對新突變采用特異性堿基錯配引入限制性內(nèi)切酶方法，自行設計錯配引物介導PCR，再用相應的限制性內(nèi)切酶進行酶切反應，分析新突變在正常人群中的發(fā)生頻率，以判斷新突變的性質(zhì)。
　　5.使用DNA MAN軟件對人類和其它種屬SSADH突變氨基酸序列進行

5、同源性比較;模擬人類SSADH空間結(jié)構(gòu)分析突變對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.在本研究的7例患兒中臨床資料相對完整，發(fā)病年齡為12天～2歲，診斷年齡為86天～5歲，臨床表現(xiàn)有抽搐、語言和運動發(fā)育落后、肌張力低下、反射減弱、智力低下等，一般生化檢查均無異常（除一例因頻繁抽搐出現(xiàn)代謝性酸中毒外），腦電圖(EEG)和頭顱核磁共振（MRI）異常，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)檢測尿中γ-羥基丁酸、2，4二羥基丁酸、3，4二羥

6、基丁酸和4，5-二羥基己酸異常成分水平增高。
　　2.7例患兒均檢測出突變位點，共檢測到9種突變，其中c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、“c.839T＞G、c.904G＞A、c.1022C＞A、c.1383-2delA為尚未報道突變，突變c.538C＞T和c.545C＞T為已報道的多態(tài)性改變。突變類型以錯義突變?yōu)橹鳌?例患兒中4例存在c.1568C＞T突變，占突變等位基因的42.9％(6/14等位基因)。患兒

7、基因突變均來自父母（除1例試管嬰兒之父外），為非新生突變。
　　3.新突變位點c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、c.1022C＞A在100例健康人中均未檢測到。
　　4.同源序列分析中p.Gly176Glu、p.Glu231Lys、p.Ser523Phe、p.Gly302Arg、p.Ala341Asp突變位點序列處于高度保守氨基酸區(qū)域，p.Va1280Gly突變位點處于保守氨基酸區(qū)域。
　　結(jié)論:

8、
　　1.在7個琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病家系中共檢測出9種突變類型(c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、c.839T＞G、c.904G＞A、c.1022C＞A、c.1383-2delA、c.538C＞T和c.545C＞T)，其中錯義突變6種，剪接缺失1種，多態(tài)性改變2個。其中7種新突變豐富了SSADH基因突變譜。
　　2.SSADH基因突變檢測發(fā)現(xiàn)中國人群突變類型以錯義突變?yōu)橹?，其中c.1568C＞T突變?yōu)?/p>

9、熱點突變，占分析的42.9％。
　　3.本研究中患兒存在的突變等位基因位點，經(jīng)驗證均分別源于父母（除1例試管嬰兒之父外），為非新生突變，并符合常染色體隱性遺傳規(guī)律。
　　4.本研究群體SSADH基因突變存在較高的遺傳異質(zhì)性，基因型與臨床表型關(guān)系較難確定。
　　5.限制性內(nèi)切酶酶切分析100名正常對照者均未顯示有突變位點的存在，故推測這些突變?yōu)橹虏⌒酝蛔儭?br>　　6.新發(fā)現(xiàn)的6種錯義突變位點對應的蛋白序列在7種種屬中