用DefH9-iaaM5基因和Rol ABC基因轉(zhuǎn)化沙田柚的研究.pdf

1、沙田柚(Citrus grandis var. shatinyou Hout) 是蕓香科柑桔屬中著名的柚類良種，在我國栽培歷史悠久，品種繁多，栽種范圍廣，面積大，年產(chǎn)量 1866985噸，遠(yuǎn)銷東南亞，但由于其種子多，平均每個果實種子數(shù)約為120多粒，嚴(yán)重影響了其商品價值和在國際市場上的競爭能力：此外，沙田柚樹體高大，不便管理，生產(chǎn)成本較高。因此，增加無核和矮化性狀已成為沙田柚遺傳改良的重要研究課題。本文以沙田柚為應(yīng)用研究對象，通過對離體

2、再生條件、抗生素篩選條件以及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)沙田柚遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，建立了高效的離體再生系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將 DefH9-iaaM5 無核基因和Rol ABC 矮化基因?qū)肷程镨郑瑢D(zhuǎn)化植株進(jìn)行了分子檢測，主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.研究了外植體的離體再生系統(tǒng)。建立了沙田柚無菌苗繁殖體系，并對外植體不定芽再生能力以及基本培養(yǎng)基、6-BA 濃度、激素組合和活性碳等因素對上胚軸不定芽再生能力的影響進(jìn)行了比較，篩選出沙田柚上胚軸

3、為離體再生體系最佳外植體，其分化不定芽的適宜培養(yǎng)基為 MS+ 3mg·L<'-1> 6-BA。 2.通過卡拉霉素敏感性試驗，確定了沙田柚上胚軸外植體不定芽誘導(dǎo)的卡拉霉素臨界耐受濃度為 75mg·L<'-1>，同時研究了頭孢霉素(Cef)和羧芐青霉素(Cb)對沙田柚上胚軸不定芽芽誘導(dǎo)和農(nóng)桿菌抑菌效果的影響，發(fā)現(xiàn)兩種脫菌劑濃度超過 500mg·L<'-1>時對上胚軸外植體不定芽的誘導(dǎo)有抑制作用，而且隨著濃度升高抑制程度加大。抑菌試驗

4、表明，Cef對EHA105和C85菌株的抑菌效果比Cb好，適宜的脫菌濃度為 500mg·L<'-1>。 3.通對影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率幾個主要因素進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，沙田柚上胚軸外植體在侵染前預(yù)培養(yǎng)2d、農(nóng)桿菌侵染時濃度OD<,600>值為0.5、侵染 15min、侵染后共培養(yǎng)2～4d可獲得較好的轉(zhuǎn)化效果，在共培養(yǎng)基中附加 200 μmol·L<'-1>乙酰丁香酮對轉(zhuǎn)化效果無明顯的影響。 4.將通過共培的上胚軸在MS+3mg·L