池蝶蚌性別相關(guān)基因feminization-1a基因的分子特征及表達(dá)分析.pdf

1、池蝶蚌（Hyriopsis schlegelii）原產(chǎn)自于日本，是一種新型優(yōu)質(zhì)的淡水育珠蚌類，具有重大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其性別決定及分化機(jī)制的研究可為池蝶蚌的種質(zhì)資源保護(hù)、種群結(jié)構(gòu)和個(gè)體發(fā)育、繁殖等研究提供理論上的依據(jù)和參考。有關(guān)性別決定相關(guān)基因的研究在脊椎動(dòng)物中已有了相當(dāng)多的報(bào)道，然而，在無脊椎動(dòng)物特別是淡水貝類中的相關(guān)研究卻很少見。本研究從池蝶蚌轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中得到的致雄化基因feminization-1a（以下簡(jiǎn)稱Hsfem-1a）的部分片

2、段，借助于RACE PCR反應(yīng)和Real-time PCR技術(shù)克隆出該基因全長(zhǎng)并對(duì)其表達(dá)譜進(jìn)行了分析，為池蝶蚌性別決定及分化機(jī)制的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。
　　池蝶蚌fem-1a基因的cDNA序列全長(zhǎng)為1356 bp，5’端非編碼區(qū)（UTR）長(zhǎng)122 bp，3’端非編碼區(qū)（UTR）長(zhǎng)355 bp，開放閱讀框(ORF)長(zhǎng)879 bp，編碼292個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量約為32.13 KDa，理論等電點(diǎn)為7.62；氨基酸組成成分中亮氨酸(L

3、eu)含量最高，約為15.1％；蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)是34.71，為穩(wěn)定蛋白；無信號(hào)肽結(jié)構(gòu)；親疏水性分析顯示該蛋白為疏水性蛋白。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該蛋白中含有大量的α-螺旋和無規(guī)則卷曲，分別占39.73%和34.25%，形成4個(gè)錨蛋白重復(fù)序列（ANK）；三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)中同樣發(fā)現(xiàn)了4個(gè)ANK模體，并且SMART結(jié)構(gòu)位點(diǎn)的預(yù)測(cè)結(jié)果相同。同源性比對(duì)和進(jìn)化樹分析顯示，池蝶蚌fem-1a基因編碼的氨基酸與太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）的

4、同源性最高。
　　池蝶蚌fem-1a基因在池蝶蚌精巢、肝胰腺、腎臟、鰓、心臟、卵巢、閉殼肌、腸、外套膜、斧足和血淋巴11個(gè)組織中均有表達(dá)，其中在精巢組織中表達(dá)量最高，其次是在卵巢、肝胰腺、腸、斧足、鰓、血淋巴、外套膜、心臟和閉殼肌中，腎臟中的表達(dá)量最低，表明Hsfem-1a基因在池蝶蚌不同組織中參與了多種生理活動(dòng)。以最低表達(dá)量的腎臟中Hsfem-1a基因表達(dá)量作為參照，Hsfem-1a基因在精巢中的表達(dá)量是腎臟中的108倍。同時(shí)根