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文檔簡介
1、青蝦,學名為日本沼蝦(Macrobrachium nipponense),是我國重要的淡水養(yǎng)殖蝦類。青蝦雌雄個體之間的生物學或經(jīng)濟性狀存在顯著差異,如雄蝦生長速度快于雌蝦,性成熟雄蝦個體明顯大于同齡雌蝦。因此,青蝦的性別控制研究具有重要的學術(shù)價值和生產(chǎn)意義。本文擬采用DNA分子標記技術(shù)分析雌雄青蝦遺傳差異,以篩選性別相關(guān)的標記。本文包括以下三個方面:1.青蝦雌雄差異的序列相關(guān)擴增多態(tài)性分析(SRAP)分析
采用100對引物
2、對太湖野生青蝦雌性混合模板(♀)和雄性混合模板(♂)分別進行SRAP分析。期中27對引物組合擴增出30條群體水平性別特異帶,22條為雄性群體特異條帶,占73.3%;8條為雌性群體特異條帶,占26.7%。
擴增出群體差異的27對SRAP組合對雌雄個體分別進行SRAP擴增,其中引物m5e2擴增出一條帶,大小為265bp,命名為m5e2-265,30尾雌性個體中有13尾擴增出此帶,占43.3%;30尾雄性個體中有5尾擴增出此帶,
3、占16.6%。比例為2.6:1(43.3%:16.6%),顯著偏離1:1,推測該片段對應(yīng)的DNA位點與性別有一定關(guān)聯(lián),其所對應(yīng)的位點可能位于性別決定基因的相鄰區(qū)域,受性別決定基因的控制。2.青蝦雌雄差異的微衛(wèi)星(SSR)分析
利用9個SSR分子標記對太湖野生青蝦雌雄個體進行遺傳多樣性分析。共檢測到54個等位基因,每個位點產(chǎn)生的等位基因數(shù)3~12個,平均每個位點產(chǎn)生6個等位基因。各等位基因在雌雄群體中的等位基因頻率均有差異,
4、其中等位基因Mni009-B,Mni001-A,WXMN13-B,E在雌雄群體中的等位基因頻率值差異顯著,分別為♀0.0357:♂0.1833(1:5.13),♀0.2321:♂0.0741(3.13:1),♀0.2500:♂0.0833(3:1),♀0.2292:♂0.0833(2.75:1),都顯著偏離1:1;等位基因WXMN03-F、G,WXMN04-B、F、H,WXMN11-D僅在少數(shù)雌性個體中出現(xiàn),WXMN13-A、H,WXM
5、N04-E、J、L僅在少數(shù)雄性個體中出現(xiàn)。以上等位基因很有可能是與性別相關(guān)的等位基因。3.鯉魚AFLP-銀染體系的建立及對青蝦適用性的研究
以建鯉為材料,對擴增片斷長度多態(tài)性(AFLP)反應(yīng)體系進行優(yōu)化,建立了適合于鯉魚的AFLP反應(yīng)體系:提取建鯉血細胞DNA為模板;50μL酶切反應(yīng)物總體積,MseI和EcoRI37℃雙酶切5h效果最佳;10μL預擴體系,引物為E+A和M+C;25μL選擴體系,預擴增產(chǎn)物稀釋40倍至30n
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