烏鱧性別相關(guān)的Dmrt基因的克隆及其組織表達(dá)特征.pdf

1、近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的需要,烏鱧(Channa argu)逐漸成為國(guó)內(nèi)的特種養(yǎng)殖品種。為提高烏鱧子代雄性率及開展烏鱧的單性養(yǎng)殖,本研究采用RT-PCR和RACE的方法克隆出了烏鱧的Dmrt1基因和Dmrt4的部分基因,并對(duì)Dmrt1的表達(dá)特性進(jìn)行了具體的分析,這將有助于了解烏鱧的性別決定機(jī)制。
　　Dmrt基因是涉及到性別決定和分化的保守基因家族,它廣泛存在于不同物種中。本研究通過使用簡(jiǎn)并引物從烏鱧的基因組DNA中獲得了Dmrt1的保

2、守域DM1及Dmrt4的保守域DM4,對(duì)DM結(jié)構(gòu)域進(jìn)行測(cè)序,通過比對(duì)確定為Dmrt基因的保守域。根據(jù)獲得的保守域序列,設(shè)計(jì)3’RACE和5’RACE的引物,采用RACE的方法擴(kuò)增Dmrt的全長(zhǎng)cDNA。
　　在烏鱧的精巢組織克隆得到烏鱧Dmrt1基因的cDNA序列,并采用半定量和定量的手段對(duì) Dmrt1 mRNA在烏鱧成魚中不同組織的表達(dá)差異進(jìn)行分析。研究獲得的烏鱧Dmrt1基因cDNA全長(zhǎng)為1573 bp,5’端非翻譯區(qū)25 b

3、p,編碼266個(gè)氨基酸的800 bp的開放閱讀框,747 bp含有脊椎動(dòng)物典型的多腺苷酸化加尾信號(hào)AATAAA的3’端非翻譯區(qū)。通過對(duì)氨基酸序列的同源性進(jìn)行分析表明,烏鱧Dmrt1基因與多種魚類相似度較高,與其他類動(dòng)物相似度較低。氨基酸序列與銀鱈魚、黑棘鯛等魚類同源性較高,并與之共同聚為魚類的Dmrt1分支。RT-PCR和實(shí)時(shí)定量結(jié)果均表明Dmrt1在雌雄烏鱧的10個(gè)樣品中,在精巢中表達(dá)量最高,相對(duì)較弱地在卵巢中表達(dá),在其余組織中Dmr

4、t1基因的表達(dá)量很少。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Dmrt1基因可能跟性腺及生殖細(xì)胞的發(fā)育有關(guān)聯(lián)。
　　在烏鱧的卵巢組織中克隆出了烏鱧的Dmrt4基因的部分序列。Dmrt4基因通過5’端擴(kuò)增,并分別得到192 bp的特異性條帶。經(jīng)過與保守域DM4進(jìn)行拼接,已經(jīng)得到332bp的片段。對(duì)保守域DM4進(jìn)行分析,可以看出雖然堿基序列有較大差異,但是編碼的氨基酸序列相似度非常高。我們可以看到,Dmrt4的進(jìn)化是高度保守的,表明此基因在性別分化和功能的