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文檔簡介
1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)是牛羊等反芻動物的一種重要消化道寄生蟲。目前,藥物防治是控制該病的主要方法,但藥物殘留、環(huán)境污染、抗藥性蟲株的出現(xiàn)和蔓延,使得傳統(tǒng)的治療受到嚴重挑戰(zhàn),迫切需要一種有效的防治方法以控制其感染和流行。
捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11蛋白是一種分子量在110ku的完整膜糖蛋白復(fù)合物,可引起與血清抗體有關(guān)的高水平的保護作用。天然H11免疫動物后,可使雄蟲減少70%、雌蟲減少80%、蟲卵減少
2、90%,且對不同年齡階段的綿羊均具有保護作用,且其保護率與抗體水平也呈正相關(guān)。但是由于原核系統(tǒng)對表達產(chǎn)物的翻譯后加工、修飾、糖基化等作用不能達到真核系統(tǒng)的要求,其重組形式僅能提供很小的免疫保護,免疫效果遠不及天然抗原。
目前獲取H11所需的成蟲是從自然感染羊的皺胃里采得,成本高且操作復(fù)雜,受季節(jié)性及羊自身感染程度等因素的限制,往往混雜其他線蟲,具有純度和數(shù)量的不確定性,不適合于長期研究,不能適應(yīng)科研的大量需要。急切需要找到
3、一種利用體外培養(yǎng)來大量獲得蟲體的方法。本研究探索了溫度、pH值、培養(yǎng)基等因素在離體培養(yǎng)中的作用及相互關(guān)系,優(yōu)化了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲離體培養(yǎng)體系。對培養(yǎng)的L4期幼蟲和自然感染的成蟲的H11天然蛋白分別進行了提取和純化,并進行了氨基肽酶活性分析。為利用體外培養(yǎng)獲取捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11天然抗原和制備天然抗原疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。
1.相同條件下,在一定的溫度范圍內(nèi),蟲卵的孵化率及孵化速度與溫度成正比,蟲卵的最適發(fā)育溫度為34℃,孵化率高達
4、97%。
2.相同條件下,NCTC135、NCTC109、和M199培養(yǎng)系中的L3可發(fā)育至L4晚期,F(xiàn)12中L4只發(fā)育至早四期,四種培養(yǎng)系中L3發(fā)育至L4的蟲體數(shù)占存活蟲體數(shù)的比例以NCTC135中的最高,達99%。
3.pH5.8-6.2時,L3發(fā)育至L4速度慢,發(fā)育率不到50%;pH6-5.6.7時,L3發(fā)育至L4的程度及發(fā)育率明顯提高,以pH6.7為最佳。
4.成功提取并純化了L4期幼蟲及
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