山羊PBMC捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Galectin受體TMEM63A和TMEM147的部分功能研究.pdf

1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）是一種寄生于反芻動(dòng)物的胃腸道線蟲，能夠?qū)е赂腥緞?dòng)物貧血、消瘦甚至死亡。半乳糖結(jié)合凝集素(galectin)是一種糖結(jié)合蛋白，能夠顯著調(diào)節(jié)寄生蟲-宿主之間的相互作用。Hco-gal-m和Hco-gal-f是由本實(shí)驗(yàn)室分別從捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的雄蟲和雌蟲體內(nèi)克隆得到的半乳糖結(jié)合凝集素。研究表明，重組Hco-gal-rm/f(rHco-gal-m/f)能夠結(jié)合在山羊外周血淋巴細(xì)胞(PBMC)表

2、面，誘導(dǎo)山羊PBMC的凋亡，對細(xì)胞因子分泌、細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖和分化等產(chǎn)生影響。這些研究結(jié)果提示，rHco-gal-m/f可能作為一種多功能的免疫調(diào)節(jié)因子參與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染過程中的宿主免疫。TMEM63A和TMEM147是捻轉(zhuǎn)血矛線蟲galectin在山羊PBMC中的受體，分布于大多數(shù)的山羊外周血淋巴細(xì)胞。研究表明，TMEM63A能夠影響Hco-gal-m/f對山羊PBMC大部分功能的調(diào)節(jié)，然而具體的分子機(jī)制以及TMEM147在其中的

3、作用還是未知。對TMEM63A和TMEM147的功能研究有利于進(jìn)一步探索捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的免疫逃避機(jī)制，并為預(yù)防和控制捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病提供了新的思路。
　　1山羊外周血淋巴內(nèi)TMEM63A結(jié)合分子的鑒定
　　本研究的目的是為了鑒定山羊外周血淋巴細(xì)胞中能與TMEM63A結(jié)合的分子。首先通過免疫共沉淀技術(shù)收集山羊外周血淋巴細(xì)胞中與TMEM63A結(jié)合的分子，用鳥槍法——液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用(shotgun LC-MS/MS)進(jìn)行蛋白的

4、質(zhì)譜鑒定。結(jié)果顯示，共有43種蛋白被鑒定，包括antigen processing and presentation通路中的MHC classⅠantigen(MHCⅠ)，toll-like receptor signaling pathway通路中的toll-like receptor9(TLR-9)，hedgehog signaling pathway通路中的Gli3 protein(Gli3)，VEGF signalingpath

5、way通路中的heat shock27 kDa protein1(HSP27)，p53 signaling pathway通路中的Bcl-2-associated X protein(BAX)以及Notch signaling pathway通路中的Deltex-2protein(DTX2)。這些蛋白可能參與到Hco-gal-m/f對山羊外周血淋巴細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)中，為更好地理解Hco-gal-m/f介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)的分子機(jī)制提供了新的線索

6、。
　　2 TMEM63A對PBMC相關(guān)信號通路的影響
　　根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫，選取了6條信號通路中的45個(gè)關(guān)鍵分子。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR的方法對TMEM63A干擾前后的山羊PBMC進(jìn)行相關(guān)信號通路分析。結(jié)果表明，TMEM63A的干擾對Gli3和DTX2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有顯著影響，然而MHCⅠ、TLR-9、HSP27、BAX及其所在信號通路關(guān)鍵分子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平卻在TMEM63A干擾后發(fā)生顯著變化。對TMEM63A相關(guān)

7、信號通路的研究為探尋TMEM63A的作用靶位點(diǎn)和研究Hco-gal-m/f的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供了新的線索。
　　3 TMEM147在Hco-Gal-m/f調(diào)節(jié)山羊PBMC功能中的作用
　　實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，TMEM147在酵母雙雜交中也能夠與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲galectin結(jié)合。為了探索TMEM147和TMEM63A在Hco-gal-m/f調(diào)節(jié)山羊PBMC功能中的不同影響，本文通過RNA干擾技術(shù)對TMEM147的功能進(jìn)行了初步研

8、究。在體外干擾48小時(shí)之后，加入rHco-gal-m共孵育12小時(shí)，然后對山羊外周血淋巴細(xì)胞的增殖、NO分泌、吞噬、遷移和凋亡進(jìn)行檢測。分析結(jié)果表明，TMEM147的干擾能夠顯著影響Hco-gal-m/f對山羊PBMC的細(xì)胞增殖、NO分泌、細(xì)胞吞噬和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用，而對細(xì)胞遷移的作用不顯著。對Hco-gal-m/f受體TMEM147的功能研究有助于進(jìn)一步闡明Hco-gal-m/f介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，為探尋捻轉(zhuǎn)血矛線蟲免疫逃避的分子機(jī)