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文檔簡介
1、錳是一種工業(yè)中廣泛應(yīng)用的金屬,它在體內(nèi)過量蓄積可導(dǎo)致毒性反應(yīng),影響機體正常生理功能。近年來隨著生殖毒理、生殖生化等領(lǐng)域研究的發(fā)展,錳對生殖系統(tǒng)的損害已越來越受到人們的重視。目前,國內(nèi)外對錳生殖毒性的研究主要集中于哺乳動物,而對禽類幾乎沒有研究。本試驗以雞支持-生精細胞為研究對象,在培養(yǎng)體系中分別加入終濃度0、2、3、4mmol·L-1氯化錳(MnCl2),作用24 h,通過對雞支持.生精細胞活性、細胞凋亡、DNA損傷、線粒體膜電位、細胞
2、色素C蛋白表達量及細胞內(nèi)Bak、Bcl-x和Caspase-3 mRNA表達水平等方面的檢測,探討錳誘導(dǎo)雞支持.生精細胞凋亡的機理。研究結(jié)果表明:
1應(yīng)用臺盼藍染色,WST-1比色法,二硝基苯肼比色法檢測MnCl2對雞支持.生精細胞活性的影響,結(jié)果顯示MnCl2能夠抑制雞支持-生精細胞活性,破壞支持細胞貼壁性能和生精細胞對支持細胞的依附性,表明MnCl2對雞支持.生精細胞具有毒性作用;
2倒置顯微鏡下觀察雞支
3、持-生精細胞生長情況,AO/EB雙熒光染色、透射電鏡觀察不同濃度MnCl2作用下支持-生精細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化,結(jié)果表明MnCl2能誘導(dǎo)支持-生精細胞凋亡,且凋亡率呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;應(yīng)用DNA Ladder、TUNEL法檢測MnCl2對雞支持-生精細胞DNA的損傷作用,結(jié)果證實MnCl2可以造成雞支持.生精細胞DNA損傷,且呈劑量一效應(yīng)關(guān)系。提示MnCl2致DNA損傷是其誘導(dǎo)雞支持.生精細胞凋亡的機制之一;
3應(yīng)用JC-1
4、熒光探針法檢測線粒體膜電位,western bolt檢測細胞色素C蛋白表達量,試劑盒檢測Caspase-3,9和線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性,實時定量PCR法檢測Bak、Bcl-x和Caspase-3 mRNA表達水平。結(jié)果顯示MnCl2能導(dǎo)致支持.生精細胞線粒體膜電位降低,胞漿內(nèi)細胞色素C表達量增加,Caspase-3,9活性升高,呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ降低,Bak mRNA表達量增加,Bcl-x和Caspase-3 m
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