亞慢性阿維菌素中毒致王鴿神經(jīng)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、阿維菌素(avermectin，AVM)是一種高效、廣譜的農(nóng)畜兩用殺蟲劑，具有優(yōu)良的驅(qū)蟲效果及安全性，但是隨著AVM用量的不斷加大，環(huán)境中AVM的蓄積量也不斷增多，已經(jīng)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成了不良的影響。鴿子及鵪鶉因其對(duì)環(huán)境中化學(xué)物質(zhì)的變化比較敏感，因此，被認(rèn)為是監(jiān)測生態(tài)環(huán)境的首選生物。本課題以王鴿腦神經(jīng)組織為研究對(duì)象，采用給王鴿飼喂添加不同劑量AVM的日糧(對(duì)照組飼喂不含AVM的全價(jià)日糧、低劑量組20 mg/(kg·diet)、中劑量組40

2、mg/(kg·diet)、高劑量組60 mg/(kg·diet)的染毒方法，復(fù)制王鴿亞慢性AVM中毒模型。在染毒后的第30d、60d、90d分別采樣，通過對(duì)王鴿腦神經(jīng)系統(tǒng)病理組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、抗氧化功能、DNA損傷、細(xì)胞凋亡及bcl-2、α-Syn mRNA表達(dá)水平的檢測和觀察，進(jìn)而探討AVM對(duì)王鴿腦神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞凋亡的時(shí)間-劑量-效應(yīng)關(guān)系。研究結(jié)果如下：
　　 1.應(yīng)用HE染色、透射電鏡以及TUNEL法，觀察不同劑量AVM在不同

3、時(shí)間對(duì)王鴿腦神經(jīng)組織毒性作用，從形態(tài)學(xué)角度驗(yàn)證了AVM能夠引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，其細(xì)胞凋亡率與AVM作用程度呈正相關(guān)。
　　 2.通過對(duì)抗氧化相關(guān)指標(biāo)以及蛋白質(zhì)羰基含量情況的檢測，證實(shí)AVM能引起神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷，結(jié)果表明，AVM致谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性下降，超氧化物歧化酶(SOD)活性降低，丙二醛(MDA)含量增加及蛋白質(zhì)羰基含量增加，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，說明AVM造成王鴿腦神經(jīng)組織發(fā)生氧化損傷，影響其正常的生理機(jī)

4、能，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　 3.應(yīng)用KCI-SDS沉淀法檢測DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)率，結(jié)果表明，AVM能夠引起王鴿腦神經(jīng)組織DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)率升高，且呈劑量.效應(yīng)關(guān)系，說明AVM可損傷王鴿腦神經(jīng)組織的DNA，DNA損傷可以進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　 4.應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測細(xì)胞內(nèi)α-Syn、bcl-2 mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示AVM能夠引起王鴿腦神經(jīng)組織內(nèi)α-Syn mRNA表達(dá)水平增加，凋亡的標(biāo)